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tq5005

银虫 (小有名气)

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专业: 药物分析

[求助] 多糖的纯化问题，求高手解答~~

本人现在在做多糖的纯化，准备先用DEAE-52柱，再用sephadex G-200精制，问题是过柱子以后的多糖收集液需要先经过硫酸苯酚显色，才能在紫外上测定其浓度。而硫酸苯酚显色这个反应本身就不稳定，所以做出来的结果重现性会不太好，想请教各位，有没有其他更方便的办法可以代替硫酸苯酚显色，去检测每管收集液的多糖含量？
还有，是不是纯化实验一定要准确了解每管收集液的多糖浓度，我可否直接用硫酸苯酚显色，肉眼观察其是否变色，来判断管内是否含有多糖，然后合并含有多糖的收集管液呢？

期待高手的解答

十分感谢！

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1楼 2013-09-04 09:21:08

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重瓣栀子

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

15楼: Originally posted by 看你行不行 at 2015-03-10 15:09:27
苯酚硫酸可以用酶标仪吗？不会腐蚀吗？一根柱子不卸下来反复再生能再生彻底吗，需要洗很多柱体积吗？...

显色后把反应液吸到酶标板上再用酶标仪扫啊，就算是腐蚀也是腐蚀酶标板，我们这了省钱，一张板都是反复用，每次用完就用水加洗洁精超声清洗后再用，但每次用之前扫一下空白板再加样，如果空白板扫出来的吸光值已经很高了，这张板就完全报废了。
柱子不卸下来反复再生也能用，一般用酸、碱处理后柱子上的杂质都能洗掉，但是多次再生后柱子内的填料会越来越紧，洗脱曲线就会有一定差异了。如果你的填料多，可以一根柱子用完了倒出来再生，用新的填料再装柱，下一次再用再生好的填料装柱，如此反复。