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tq5005

银虫 (小有名气)

[求助] 多糖的纯化问题,求高手解答~~

本人现在在做多糖的纯化,准备先用DEAE-52柱,再用sephadex G-200精制,问题是过柱子以后的多糖收集液需要先经过硫酸苯酚显色,才能在紫外上测定其浓度。而硫酸苯酚显色这个反应本身就不稳定,所以做出来的结果重现性会不太好,想请教各位,有没有其他更方便的办法可以代替硫酸苯酚显色,去检测每管收集液的多糖含量?
还有,是不是纯化实验一定要准确了解每管收集液的多糖浓度,我可否直接用硫酸苯酚显色,肉眼观察其是否变色,来判断管内是否含有多糖,然后合并含有多糖的收集管液呢?

期待高手的解答十分感谢!
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看你行不行

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 重瓣栀子 at 2013-09-10 17:30:42
我做的时候都用苯酚硫酸显色后用酶标仪测吸光度,然后用吸光度来绘制洗脱曲线,再把峰的部位收集透析。曾经一根柱子上反复再生上样做了十次,每次的洗脱曲线都是差不多的。

苯酚硫酸可以用酶标仪吗?不会腐蚀吗?一根柱子不卸下来反复再生能再生彻底吗,需要洗很多柱体积吗?
坚挺的活着,相信美好的未来
15楼2015-03-10 15:09:27
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-Drake-

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
PSA: 金币+1, 3u 2013-09-04 11:16:57
多糖的含量测定的确让人头疼,不稳定,要求每次操作条件基本一致,就连同一批不同瓶的硫酸对结果都有很大影响,但目前再也没什么更好的方法。
前面几瓶可以,后面收集到小容量瓶,还是得测
2楼2013-09-04 09:47:50
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
PSA: 金币+1, 3u 2013-09-04 11:17:04
你如何从柱子上收集的?不用紫外分析仪收集吗?如果你采用紫外分析仪收集的话,多糖貌似可以用254nm的波长进行检测。
我建议你拿精制后的多糖,走一下紫外扫描,看最大吸收波长在哪个范围内。
然后在收集时用这个波长进行检测,收集峰,进行分析。
3楼2013-09-04 10:12:35
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tq5005

银虫 (小有名气)

非常感谢,纯化仪上确实连有紫外分析仪,不过我看到文献上是用苯酚浓硫酸显色后再来确定多糖的含量,不太了解紫外直接测定是否可行,所以想在这请教做过多糖纯化的朋友。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-09-04 16:23:13
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