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szasza

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 激光共聚焦观察水稻颖果的亚细胞定位

有人做过激光共聚焦观察转基因植物的GFP表达么,用的是稳转植株进行观察,我想问一下上镜观察前的前处理步骤是什么?如何制片?能否长期保存?能否固定保存?谢谢!
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szasza

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zb0806030 at 2013-09-03 20:05:21
固定可以,可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛(戊二醛的浓度我有点不太确定了,你可以查一下文献),但你想长期保存不太可能,因为GFP的荧光会淬灭,你固定以后可以避光保存,至于能保存多长时间 ...

多谢了!再问一下,我今天在荧光显微镜下观察了水稻颖果的横断面,只有微弱的荧光,而未转GFP的材料也有强度差不多的荧光,是不是取材的方法有误,或是取回的时间太长,蛋白的荧光猝灭了,应该如何取材(是否要放在缓冲液里,或是冰盒里)?
5楼2013-09-03 22:14:00
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zb0806030

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+5, 很好 2013-09-03 21:35:28
如果是稳定表达的植株,观察前不用做什么处理,就直接对要观察的部位进行制片就行了,只要保证盖玻片盖上以后能使材料固定住不动就行。
    用GFP观察就是为了活体观察,肯定不能固定啊,只能是你想观察几天的苗就提前种好,到时间就观察。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
厚积薄发
2楼2013-09-02 22:57:31
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szasza

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zb0806030 at 2013-09-02 22:57:31
如果是稳定表达的植株,观察前不用做什么处理,就直接对要观察的部位进行制片就行了,只要保证盖玻片盖上以后能使材料固定住不动就行。
    用GFP观察就是为了活体观察,肯定不能固定啊,只能是你想观察几天的苗就 ...

我不需要观察活体,想固定后保存,只要不影响GFP的荧光就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-09-02 23:41:31
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zb0806030

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+8, 应助指数+1, 我们以前也没有保存过,不过今天看见你的保存方法了.如果长时间保存的话,保存种子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
固定可以,可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛(戊二醛的浓度我有点不太确定了,你可以查一下文献),但你想长期保存不太可能,因为GFP的荧光会淬灭,你固定以后可以避光保存,至于能保存多长时间就跟你的材料有关了,像我们拟南芥的材料,一般也就保存一两天荧光就不行了。另外保存的时候可以加点抗荧光淬灭剂或许可以效果好一点,但不要指望能保存很长时间。
厚积薄发
4楼2013-09-03 20:05:21
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