24小时热门版块排行榜    

查看: 1533  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

szasza

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 激光共聚焦观察水稻颖果的亚细胞定位

有人做过激光共聚焦观察转基因植物的GFP表达么,用的是稳转植株进行观察,我想问一下上镜观察前的前处理步骤是什么?如何制片?能否长期保存?能否固定保存?谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

szasza

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zb0806030 at 2013-09-03 20:05:21
固定可以,可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛(戊二醛的浓度我有点不太确定了,你可以查一下文献),但你想长期保存不太可能,因为GFP的荧光会淬灭,你固定以后可以避光保存,至于能保存多长时间 ...

多谢了!再问一下,我今天在荧光显微镜下观察了水稻颖果的横断面,只有微弱的荧光,而未转GFP的材料也有强度差不多的荧光,是不是取材的方法有误,或是取回的时间太长,蛋白的荧光猝灭了,应该如何取材(是否要放在缓冲液里,或是冰盒里)?
5楼2013-09-03 22:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

zb0806030

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xy656691: 金币+5, 很好 2013-09-03 21:35:28
如果是稳定表达的植株,观察前不用做什么处理,就直接对要观察的部位进行制片就行了,只要保证盖玻片盖上以后能使材料固定住不动就行。
    用GFP观察就是为了活体观察,肯定不能固定啊,只能是你想观察几天的苗就提前种好,到时间就观察。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
厚积薄发
2楼2013-09-02 22:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

szasza

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zb0806030 at 2013-09-02 22:57:31
如果是稳定表达的植株,观察前不用做什么处理,就直接对要观察的部位进行制片就行了,只要保证盖玻片盖上以后能使材料固定住不动就行。
    用GFP观察就是为了活体观察,肯定不能固定啊,只能是你想观察几天的苗就 ...

我不需要观察活体,想固定后保存,只要不影响GFP的荧光就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-09-02 23:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zb0806030

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+8, 应助指数+1, 我们以前也没有保存过,不过今天看见你的保存方法了.如果长时间保存的话,保存种子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
固定可以,可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛(戊二醛的浓度我有点不太确定了,你可以查一下文献),但你想长期保存不太可能,因为GFP的荧光会淬灭,你固定以后可以避光保存,至于能保存多长时间就跟你的材料有关了,像我们拟南芥的材料,一般也就保存一两天荧光就不行了。另外保存的时候可以加点抗荧光淬灭剂或许可以效果好一点,但不要指望能保存很长时间。
厚积薄发
4楼2013-09-03 20:05:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 3/150 2026-11-02 01:00 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 4/200 2026-11-02 00:50 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-02 00:47 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:37 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-02 00:29 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-02 00:24 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:21 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:15 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 23:58 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 21:26 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 16:58 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +9 zuesli 2026-10-27 15/750 2026-11-01 12:59 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
信息提示
请填处理意见