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szasza铁杆木虫 (职业作家)
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[求助]
激光共聚焦观察水稻颖果的亚细胞定位
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| 有人做过激光共聚焦观察转基因植物的GFP表达么，用的是稳转植株进行观察，我想问一下上镜观察前的前处理步骤是什么？如何制片？能否长期保存？能否固定保存？谢谢！ |
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2楼2013-09-02 22:57:31
szasza
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 35304.2
- 散金: 106
- 红花: 6
- 帖子: 3782
- 在线: 791.4小时
- 虫号: 1967881
- 注册: 2012-09-01
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
3楼2013-09-02 23:41:31
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+8, 应助指数+1, 我们以前也没有保存过,不过今天看见你的保存方法了.如果长时间保存的话,保存种子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
xy656691: 金币+8, 应助指数+1, 我们以前也没有保存过,不过今天看见你的保存方法了.如果长时间保存的话,保存种子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
| 固定可以，可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛（戊二醛的浓度我有点不太确定了，你可以查一下文献），但你想长期保存不太可能，因为GFP的荧光会淬灭，你固定以后可以避光保存，至于能保存多长时间就跟你的材料有关了，像我们拟南芥的材料，一般也就保存一两天荧光就不行了。另外保存的时候可以加点抗荧光淬灭剂或许可以效果好一点，但不要指望能保存很长时间。 |
4楼2013-09-03 20:05:21
szasza
铁杆木虫 (职业作家)
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5楼2013-09-03 22:14:00
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢！ 2013-09-04 21:27:25
szasza: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 非常感谢！ 2013-09-04 21:27:25
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如果你看到与未转材料类似的荧光的话，以我的经验判断应该是材料的自发荧光，不是真正的蛋白的荧光。 像你说的这种情况有很多可能:一种是你的蛋白不在该部位表达，另一种是蛋白连GFP没转入植株，还有就是取材时间太长荧光淬灭了，我不太了解你的材料，你可以自己分析一下哪种可能性比较大。对于最后一种情况，你可以试一下取材后尽快观察或者取材后固定，但固定也是需要抽气的，这样固定液才能快速进入材料起到做用。取材的方法应该不会有太大的问题，我觉得。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
6楼2013-09-03 22:58:16
40