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yuqinglosin

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR过程断电疑问已有5人参与

PCR28个循环时突然断电,没有拿出来,在pcr仪里放了20个小时后接着循环10次。有几个疑问:
1.在变性时中断,温度随时间而缓慢降至室温,这个过程中DNA会正常复性吗还是与引物结合?如果重新PCR从变性开始循环,是否会正常进行?
2.在退火阶段中断,温度随时间而缓慢降至室温,这个过程中DNA与引物结合的链有变化吗?如果重新PCR从变性开始循环,是否会正常进行?
3.在延伸阶段中断,温度随时间而缓慢降至室温,这个过程中有什么变化?如果重新PCR从变性开始循环,是否会正常进行?
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意孤城_

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2013-08-31 11:49:24
断电了,不管哪个阶段如果从新接通电源,会造成P不出来。具体原因不清楚 不过尝试过,P不出来的
2楼2013-08-31 11:35:51
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yuxiumin565

金虫 (初入文坛)


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断电不清楚,我试过一个PCR分成好几次(实验室的PCR仪跑10个循环左右就停了,只能停了后接着重新开)是可以出来的。good luck。
3楼2013-08-31 13:25:55
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yilunanxia

金虫 (正式写手)


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我觉得哪个阶段停电影响都不是很大,但是楼主的问题在于一点是你中间中断的时间有点长,酶之类的在非储藏温度下那么长时间估计不行了。
4楼2013-08-31 15:34:05
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


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不能低估Taq酶的活性,如果没有DNase的污染,其他的都应该比较稳定的。再接着跑,然后上胶,你现在已经是nothing to lose了。
行至水穷处,坐看云起时
5楼2013-08-31 23:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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断电时在循环的什么过程并不怎么重要。如果已经P了28个循环,应该有相当多的产物了,这样再P时目的片段容易直接自身发生配对而不是与引物配对,即使再做10个循环,效果可能与28个循环时差不多。如果PCR程序才开始没多久,产物还很少,继续P的话问题不大。
6楼2013-08-31 23:16:44
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