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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR过程断电疑问
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yuqinglosin

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR过程断电疑问 已有5人参与

PCR28个循环时突然断电，没有拿出来，在pcr仪里放了20个小时后接着循环10次。有几个疑问：
1.在变性时中断，温度随时间而缓慢降至室温，这个过程中DNA会正常复性吗还是与引物结合？如果重新PCR从变性开始循环，是否会正常进行?
2.在退火阶段中断，温度随时间而缓慢降至室温，这个过程中DNA与引物结合的链有变化吗？如果重新PCR从变性开始循环，是否会正常进行？
3.在延伸阶段中断，温度随时间而缓慢降至室温，这个过程中有什么变化？如果重新PCR从变性开始循环，是否会正常进行？
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1楼 2013-08-31 11:07:39
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意孤城_

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-31 11:49:24
断电了，不管哪个阶段如果从新接通电源，会造成P不出来。具体原因不清楚 不过尝试过，P不出来的
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2楼2013-08-31 11:35:51
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yuxiumin565

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
断电不清楚，我试过一个PCR分成好几次（实验室的PCR仪跑10个循环左右就停了，只能停了后接着重新开）是可以出来的。good luck。
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3楼2013-08-31 13:25:55
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得哪个阶段停电影响都不是很大，但是楼主的问题在于一点是你中间中断的时间有点长，酶之类的在非储藏温度下那么长时间估计不行了。
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4楼2013-08-31 15:34:05
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不能低估Taq酶的活性，如果没有DNase的污染，其他的都应该比较稳定的。再接着跑，然后上胶，你现在已经是nothing to lose了。
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2013-08-31 23:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
断电时在循环的什么过程并不怎么重要。如果已经P了28个循环，应该有相当多的产物了，这样再P时目的片段容易直接自身发生配对而不是与引物配对，即使再做10个循环，效果可能与28个循环时差不多。如果PCR程序才开始没多久，产物还很少，继续P的话问题不大。
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6楼2013-08-31 23:16:44
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