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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot
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charlie9

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 飘零的叶子 at 2013-08-29 18:27:11
额，一抗是刚刚换过新的，是AB CAM的...

是不时这个抗体压根儿就不识别这种变性的蛋白，与抗体新旧没关系。楼主抗体肯定是用于Western的吗？肯定是用于检测变性的蛋白，而不是非变性得蛋白吗？
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11楼2013-08-30 08:25:04
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by charlie9 at 2013-08-30 08:25:04
是不时这个抗体压根儿就不识别这种变性的蛋白，与抗体新旧没关系。楼主抗体肯定是用于Western的吗？肯定是用于检测变性的蛋白，而不是非变性得蛋白吗？...

抗体说明书上明确写了可以用于做wb，效价也是明确的呀
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12楼2013-08-30 08:45:42
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 00:25:10
细菌在蛋白loading buffer里也会部分破碎，煮过后会完全破碎。所以所谓没有破碎的菌应该也算是全菌蛋白了。至于为什么抗体不识别，可能是所用抗体的特异性问题，或者是western本身没有做好。如果你能在考染的胶上看 ...

额，好吧，现在看来应该是western没有做好了
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13楼2013-08-30 08:46:52
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 00:25:10
细菌在蛋白loading buffer里也会部分破碎，煮过后会完全破碎。所以所谓没有破碎的菌应该也算是全菌蛋白了。至于为什么抗体不识别，可能是所用抗体的特异性问题，或者是western本身没有做好。如果你能在考染的胶上看 ...

您有比较好的做western的方法吗？参考一下
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14楼2013-08-30 08:47:20
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小鞋匠126_

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是这个蛋白不是你的，而是本体表达的
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15楼2013-08-30 10:00:58
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议你用纯化的蛋白做一下western，这样就可以判定一抗是不是有问题。
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16楼2013-09-01 10:44:26
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 小鞋匠126_ at 2013-08-30 10:00:58
很有可能是这个蛋白不是你的，而是本体表达的

这也有可能，但是为什么我的蛋白不显色呢，抗体的问题？！
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17楼2013-09-02 10:04:14
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
怎么帮忙啊。。。都没看懂你写的什么。。。
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
18楼2013-09-03 05:19:55
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