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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] western blot

最近在做wb，但是一直都不出结果，也换了新的抗体，还是不行，哪位大侠可以帮我分析一下这是什么原因啊，图片已经上传了，样品1的蛋白预测分子量是27kd，样品2的蛋白预测分子量为20kd，从sds-page上看的话与对照比较是在预测分子量大小有表达的，但是wb却不显色，这是为什么啊，难道那就不是我的蛋白？！大侠们，帮帮忙吧，真的快被折腾疯了，老板各种催各种逼啊
western blot
1.jpg
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1楼 2013-08-29 09:40:58
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by charlie9 at 2013-08-29 15:10:14
一抗或二抗都有可能不好使。楼主何不切胶去测序。

额，一抗是刚刚换过新的，是AB CAM的
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9楼2013-08-29 18:27:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 13:22:37
用的什么抗体？his-tag吗？样品是什么？是普通的粗提，还是IPTG诱导表达？此外，你的电泳有5道，你只标了3个，另外两个是什么？
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2楼2013-08-29 13:06:08
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-29 21:21:41
用的是his抗体吗？
如果WB折腾不出来就直接切胶质谱鉴定或N端测序好了，一个条带才几百块，很快出结果而且很准确
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3楼2013-08-29 13:53:38
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-29 13:06:08
用的什么抗体？his-tag吗？样品是什么？是普通的粗提，还是IPTG诱导表达？此外，你的电泳有5道，你只标了3个，另外两个是什么？

不是his-tag的，样品是菌的破碎上清，样品1左边那个是破碎沉淀，右边是没有破碎的菌直接水溶以后上的样。
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4楼2013-08-29 14:25:49
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