[求助] western blot

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

western blot没有结果是怎么回事~~ 已经有12人回复
关于western blot样品制备已经有8人回复
western blot 条带已经有15人回复
western blot 出不来结果！！！已经有17人回复
western blot结果分析已经有20人回复
western-blot 技术已经有12人回复
western blot 第一次曝光有条带，而且浓厚，第二次就没有了。。。已经有13人回复
western blot 背景深浅问题，请大家指教下啊已经有6人回复
哪里可以找到western blot 整套试剂的配置以及购买指南啊？？已经有15人回复
western blot实验技术已经有14人回复
求助，Western-Blot转膜不成功已经有22人回复
western blot中蛋白质转印问题已经有17人回复
提供Western blot技术服务已经有63人回复
求助western blot 已经有5人回复
western blot 求助，请高手指点一下已经有8人回复
western blot时marker问题求助已经有18人回复
Western-blot 膜封闭时间？已经有7人回复
【求助/交流】westernblot 已经有10人回复
【求助/交流】western blot 缺带断带已经有21人回复
【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办已经有19人回复
【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀已经有10人回复
【求助/交流】western blot用奶粉封闭的原理已经有18人回复
【分享】个人整理 Western Blot(转）已经有73人回复

1楼2013-08-29 09:40:58

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-29 13:06:08
用的什么抗体？his-tag吗？样品是什么？是普通的粗提，还是IPTG诱导表达？此外，你的电泳有5道，你只标了3个，另外两个是什么？

不是his-tag的，样品是菌的破碎上清，样品1左边那个是破碎沉淀，右边是没有破碎的菌直接水溶以后上的样。

4楼2013-08-29 14:25:49

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

3楼: Originally posted by 江南 at 2013-08-29 13:53:38
用的是his抗体吗？
如果WB折腾不出来就直接切胶质谱鉴定或N端测序好了，一个条带才几百块，很快出结果而且很准确

额，不是his抗体，为什么都这么问啊？wb不应该灵敏度挺高的吗？！为什么会出这种的结果呢？

5楼2013-08-29 14:59:49

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

6楼: Originally posted by charlie9 at 2013-08-29 15:10:14
一抗或二抗都有可能不好使。楼主何不切胶去测序。

额，一抗是刚刚换过新的，是AB CAM的

9楼2013-08-29 18:27:11

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

11楼: Originally posted by charlie9 at 2013-08-30 08:25:04
是不时这个抗体压根儿就不识别这种变性的蛋白，与抗体新旧没关系。楼主抗体肯定是用于Western的吗？肯定是用于检测变性的蛋白，而不是非变性得蛋白吗？...

抗体说明书上明确写了可以用于做wb，效价也是明确的呀

12楼2013-08-30 08:45:42

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-30 00:25:10
细菌在蛋白loading buffer里也会部分破碎，煮过后会完全破碎。所以所谓没有破碎的菌应该也算是全菌蛋白了。至于为什么抗体不识别，可能是所用抗体的特异性问题，或者是western本身没有做好。如果你能在考染的胶上看 ...

额，好吧，现在看来应该是western没有做好了

13楼2013-08-30 08:46:52

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

您有比较好的做western的方法吗？参考一下

14楼2013-08-30 08:47:20

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 451.5
散金: 78
红花: 2
帖子: 139
在线: 97.4小时
虫号: 1014719
注册: 2010-05-09
性别: MM
专业: 蛋白质组学

引用回帖:

15楼: Originally posted by 小鞋匠126_ at 2013-08-30 10:00:58
很有可能是这个蛋白不是你的，而是本体表达的

这也有可能，但是为什么我的蛋白不显色呢，抗体的问题？！

17楼2013-09-02 10:04:14