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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序问题
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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序问题

目的片段连表达载体，菌落PCR有条带，然后送去测序，先用自己的特异性引物测序能测到目的片段，用通用引物测就是无信号了。。。。我这是没连进去么？但是双酶切验证切开了啊。。。求高手指点迷津啊。。。。
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1楼 2013-08-28 15:07:03
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by dewdan at 2013-08-30 09:37:46
我是直接送菌液测序的，通用引物应该不会错，是载体说明书上提供的序列，之前有一个基因也是这个载体，用这个通用引物测序成功了...

你可以自己抽质粒，质粒鉴定好了，再送去测序
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-08-30 11:30:09
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gyesang

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-30 13:39:28
两个问题：
1. 自己提的质粒质量不高--这种情况 重新转化提取质粒送测序

2. 通用引物不好，用错通用引物了，或者载体上没有该通用引物位点
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2楼2013-08-28 16:28:37
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dewdan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-28 16:28:37
两个问题：
1. 自己提的质粒质量不高--这种情况 重新转化提取质粒送测序

2. 通用引物不好，用错通用引物了，或者载体上没有该通用引物位点

我是直接送菌液测序的，通用引物应该不会错，是载体说明书上提供的序列，之前有一个基因也是这个载体，用这个通用引物测序成功了
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3楼2013-08-30 09:37:46
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dewdan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-30 11:30:09
你可以自己抽质粒，质粒鉴定好了，再送去测序...

直接送菌液不行吗？有什么区别吗？
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5楼2013-08-31 20:01:18
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