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dewdan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序问题

目的片段连表达载体,菌落PCR有条带,然后送去测序,先用自己的特异性引物测序能测到目的片段,用通用引物测就是无信号了。。。。我这是没连进去么?但是双酶切验证切开了啊。。。求高手指点迷津啊。。。。
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gyesang

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-30 13:39:28
两个问题:
1. 自己提的质粒质量不高--这种情况 重新转化提取质粒送测序

2. 通用引物不好,用错通用引物了,或者载体上没有该通用引物位点
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-08-28 16:28:37
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dewdan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-28 16:28:37
两个问题:
1. 自己提的质粒质量不高--这种情况 重新转化提取质粒送测序

2. 通用引物不好,用错通用引物了,或者载体上没有该通用引物位点

我是直接送菌液测序的,通用引物应该不会错,是载体说明书上提供的序列,之前有一个基因也是这个载体,用这个通用引物测序成功了
3楼2013-08-30 09:37:46
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by dewdan at 2013-08-30 09:37:46
我是直接送菌液测序的,通用引物应该不会错,是载体说明书上提供的序列,之前有一个基因也是这个载体,用这个通用引物测序成功了...

你可以自己抽质粒,质粒鉴定好了,再送去测序
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-08-30 11:30:09
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dewdan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-30 11:30:09
你可以自己抽质粒,质粒鉴定好了,再送去测序...

直接送菌液不行吗?有什么区别吗?
5楼2013-08-31 20:01:18
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人觉得楼主可以换一家测序公司试一下
6楼2013-09-04 10:09:22
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