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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 细胞质膜染色
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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞质膜染色

构建了目的基因的GFP融合蛋白，转化进入拟南芥，有报道说该基因在质膜中也有少量表达，想通过质膜染色的方法来观察其中是否会有绿色荧光，不知道此法可行性如何，望赐教，感激。
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1楼 2013-08-27 02:37:33
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
faile18: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-27 07:35:08
直接在激光共聚焦显微镜下观察GFP荧光就可以了，为了验证是否在细胞膜上，可以同时使用FM4-64
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2楼2013-08-27 02:49:46
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-08-27 02:49:46
直接在激光共聚焦显微镜下观察GFP荧光就可以了，为了验证是否在细胞膜上，可以同时使用FM4-64

共聚焦下拟南芥的自发荧光影响会如何?可否详细说明如何同时使用FM4-64?
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3楼2013-08-27 07:35:13
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-08-27 02:49:46
直接在激光共聚焦显微镜下观察GFP荧光就可以了，为了验证是否在细胞膜上，可以同时使用FM4-64

另外,我在共聚焦下观察过此基因在洋葱表皮细胞的瞬时表达,该基因主要是在ER上表达,但无法确定是否有少量或部分存在质膜上.
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4楼2013-08-27 07:37:56
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by faile18 at 2013-08-27 07:35:13
共聚焦下拟南芥的自发荧光影响会如何?可否详细说明如何同时使用FM4-64?...

FM4-64作为细胞膜marker已经差不多被用烂了，这两天开会差不多见了几百张用这种燃染料的照片。楼主可以看看invitrigen对这种产品的介绍和这几年发表文献中的使用方法。至于ER，可以考虑用HDEL作为标记。
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5楼2013-08-31 06:19:31
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