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whyxmc

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助--肝微粒体孵育实验

各位虫友，大家好，我最近在做肝微粒体孵育实验 但是没有反应，
我的反应体系是：肝微粒体 + 药 + NADPH + Mgcl2 + 缓冲液 → 共1ml ，
先将 肝微粒体 + 药 + Mgcl2 + 缓冲液37℃预孵育5min，NADPH 37℃预孵育5min  然后加到一块，于5、10、20、30、60、90、120min取100ul加100ul冰冷的甲醇溶液并放入-20℃冰箱中终止反应。
肝微粒体是直接买的，终浓度为1mg/ml。 NADPH四钠盐买的是罗氏的，用水配后分装小瓶，-80度冷冻，随用随拿，反应终浓度1mmol /L  。药物先取了个中间值试试，是600 umol/L，还有一个终浓度5mmol/L的Mgcl2。肝微粒体和NADPH应该都没有什么问题啊 但是却没什么反应 这是怎么回事呢 难道不该用NADPH或者是用水配不行？还是很说我的浓度有问题呢，我的缓冲液是ph7.4的磷酸钾缓冲液， 望各位虫友不吝赐教！金币奉送！

[ Last edited by 1949stone on 2013-8-27 at 07:55 ]
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1楼 2013-08-26 15:56:34
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blwang1021

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by whyxmc at 2013-08-29 15:24:40
以下是我最终配置，希望您能看一下有哪里不对需要改正的，小妹初学，实属菜鸟啊，忘提出宝贵意见：
1） 0.1mol/L  磷酸钾缓冲溶液（PH 7.4）
配置：1mol/L的K2HPO4  取17.418 mg双蒸水定容至100ml    取80.2ml
...

请问你的氯化镁浓度是不是配低了？
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只要决心成功，失败永远不会把我击垮
18楼2018-11-28 10:51:20
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