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[求助]
TA克隆求助
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本人前面做TA克隆，将PCR产物（1000bp多点）切胶回收后连接pMD19-T simple载体（体系：载体1uL，PCR产物4uL，Solution I 5uL），16 ℃连接1h（说明书要求30min），先后转化DH5α感受态（鼎国）和Top10（天根），涂氨苄平板，都不长菌落。 请各位虫友帮忙分析一下，感激不尽！ |
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 分子生化实验经验积累 |
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sxxuan
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-26 18:34:29
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前面的虫友都讲了pcr产物加A和质量之类的问题了 我曾经比较过，pMD18-T连接30min或1h的效率其实是比较低的，估计这个pMD19可能也是差不多。如果可以的话，连接过夜，或者22℃连接2h，效果会好很多。 其实如果在PCR产物正常加A，产物质量也高，感受态也好，转化步骤也正常的情况下，就算连接不彻底，转化也不会有太大问题。但问题就是你得确保上述都很好。 |
7楼2013-08-26 11:14:07
guxinhan123
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2楼2013-08-25 21:11:05
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cicelyzh
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4楼2013-08-25 23:21:55
6