24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1491  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

M110935

金虫 (小有名气)

[求助] TA克隆求助

本人前面做TA克隆,将PCR产物(1000bp多点)切胶回收后连接pMD19-T simple载体(体系:载体1uL,PCR产物4uL,Solution I 5uL),16 ℃连接1h(说明书要求30min),先后转化DH5α感受态(鼎国)和Top10(天根),涂氨苄平板,都不长菌落。
请各位虫友帮忙分析一下,感激不尽!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助, 用rTaq酶,前面做的时候没设对照,后面会试试,谢谢。 2013-08-26 14:10:13
PCR是用的Taq酶吗?PCR产物回收后定量,按照浓度建立连接体系。此外,连接和转化是最好有正负对照。如果目标克隆什么都不长,硬参考正对照是否做出来。
4楼2013-08-25 23:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-25 22:38:45
M110935: 金币+1, 有帮助, 载体是新买的,目前怀疑是感受态的问题,在重新做。谢谢 2013-08-26 14:09:16
换个新的载体或者重做感受态试下
2楼2013-08-25 21:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子墨无极

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收产物浓度和纯度怎么样
追求无止境
3楼2013-08-25 22:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujitianqing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-08-26 14:13:59
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-26 18:34:14
个人觉得购买的感受态、连接载体试剂盒不会有问题。
载体和PCR产物比例有没问题?
PCR产物末端是否有游离的A?
转化步骤是否有问题?经过热激吗?转化过程中加培养基恢复抗氨苄的培养基最好是SOC。
氨苄浓度做好不要太高,50ng/ml就可以了。
5楼2013-08-26 09:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277跪求调剂 +5 1915668 2026-03-27 8/400 2026-03-27 19:53 by WYUMater
[考研] 265求调剂 +5 小木虫085600 2026-03-27 5/250 2026-03-27 17:34 by 红玉佳人
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +10 幸运的酱酱 2026-03-22 12/600 2026-03-27 16:08 by muchong357
[考研] 0856,材料与化工321分求调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 4/200 2026-03-27 13:07 by yhmsz
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 6/300 2026-03-26 20:37 by fmesaito
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 352求调剂 +4 大米饭! 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见