24小时热门版块排行榜    

查看: 1799  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

M110935

金虫 (小有名气)

[求助] TA克隆求助

本人前面做TA克隆,将PCR产物(1000bp多点)切胶回收后连接pMD19-T simple载体(体系:载体1uL,PCR产物4uL,Solution I 5uL),16 ℃连接1h(说明书要求30min),先后转化DH5α感受态(鼎国)和Top10(天根),涂氨苄平板,都不长菌落。
请各位虫友帮忙分析一下,感激不尽!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujitianqing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-08-26 14:13:59
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-26 18:34:14
个人觉得购买的感受态、连接载体试剂盒不会有问题。
载体和PCR产物比例有没问题?
PCR产物末端是否有游离的A?
转化步骤是否有问题?经过热激吗?转化过程中加培养基恢复抗氨苄的培养基最好是SOC。
氨苄浓度做好不要太高,50ng/ml就可以了。
5楼2013-08-26 09:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-25 22:38:45
M110935: 金币+1, 有帮助, 载体是新买的,目前怀疑是感受态的问题,在重新做。谢谢 2013-08-26 14:09:16
换个新的载体或者重做感受态试下
2楼2013-08-25 21:11:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子墨无极

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
回收产物浓度和纯度怎么样
追求无止境
3楼2013-08-25 22:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
M110935: 金币+1, ★★★很有帮助, 用rTaq酶,前面做的时候没设对照,后面会试试,谢谢。 2013-08-26 14:10:13
PCR是用的Taq酶吗?PCR产物回收后定量,按照浓度建立连接体系。此外,连接和转化是最好有正负对照。如果目标克隆什么都不长,硬参考正对照是否做出来。
4楼2013-08-25 23:21:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:49 by G6APbkg8SA6w
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:39 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见