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M110935

金虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 434.5
散金: 848
红花: 5
帖子: 168
在线: 27.8小时
虫号: 1949727
注册: 2012-08-21
性别: GG
专业: 动物遗传学

[求助] TA克隆求助

本人前面做TA克隆，将PCR产物（1000bp多点）切胶回收后连接pMD19-T simple载体（体系：载体1uL，PCR产物4uL，Solution I 5uL），16 ℃连接1h（说明书要求30min），先后转化DH5α感受态（鼎国）和Top10（天根），涂氨苄平板，都不长菌落。
请各位虫友帮忙分析一下，感激不尽！

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1楼 2013-08-25 19:39:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)

应助: 21 (小学生)
金币: 2618
散金: 35
红花: 4
帖子: 612
在线: 174.8小时
虫号: 1424985
注册: 2011-10-01
性别: GG
专业: 微生物药物

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
M110935: 金币+3, ★★★很有帮助, 实在太感谢你了。今天我就按你说的去做 2013-08-26 14:34:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-26 18:34:51
gyesang: 回帖置顶 2013-08-26 18:34:53

楼主你好曾经我也遇到这样的问题现在基本上不会了
我的解决办法如下：
1、你的连接体系没有问题我的大小也是和你的差不多大也是这么连接的，我不是16℃连接1小时，你可以试试4℃过夜连接试试，我比较过二者的差异性，后者的效果很好，我一开始是16℃连接长的不多或者很少，但是改用4℃过夜连接，每次都会长出来，且转化子很多；
2、你的感受态很可能有问题，你可以自己试试做下感受态，感受态在制作和使用的过程中必须要全程冰浴，如果你没有全程冰浴，很可能转化效率就会很低，基本上没有转化子。
最后你试试吧，如果还有问题可以联系我啊希望你顺利解决问题!