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jiangcheng14

金虫 (小有名气)

[求助] 什么实验可以验证一个蛋白对dna的nicking作用

纯化了一个蛋白,怎样做实验看它有没有对dna的nicking作用
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-09-20 20:21:14
我已经想好了试验方法,有很多种。我需要楼主先回答一些问题,以便对于试验方法有所选择。
1.该蛋白质的识别DNA双链是否有已知的DNA的二级结构或者一级结构信息,或者是否有同源蛋白的识别DNA双链是否有已知的DNA的二级结构或者一级结构信息作为参考?
2.目的蛋白质的基因是否知道?或者是否有同源蛋白的基因已经获知?
3.目的蛋白质切割某一段DNA的双链序列的一条链上切出一个缺口是仅切割不连接?还是既切又连?
4.目的蛋白质的一级结构是否已知?
5.目的蛋白质是否含有任何已知的辅基或者辅酶或者金属离子?
6.目的蛋白质在不切割一段DNA的双链序列的一条链时是否与DNA非共价结合?
7.是否已知可能存在的目的蛋白质的非共价结合的调控蛋白质?
8.目的蛋白质的细胞定位是否已知?

这些问题实际上都可能包含在我提供的protocols中,如果楼主希望我提供的protocols有具体的参考价值,请回答以上问题。对于以上问题没有答案也是一种的有效的答案,对于选择protocols仍然是有帮助的。
5楼2013-08-26 22:31:13
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试验方法有很多种,但是我要知道:你说的nicking具体指什么?要达到什么程度?
2楼2013-08-23 23:12:56
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jiangcheng14

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-08-23 23:12:56
试验方法有很多种,但是我要知道:你说的nicking具体指什么?要达到什么程度?

我想看看它会不会在某一段双链序列的一条链上切出一个缺口
3楼2013-08-24 11:13:54
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

我已经大致有了试验流程的设计方案,晚些时间回答你。
4楼2013-08-24 20:28:37
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