| 查看: 1095 | 回复: 1 | ||
xls8678759铁虫 (小有名气)
|
[求助]
关于小鼠骨髓间充质细胞分离培养鉴定 已有1人参与
|
|
1.4 供体小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养 ① B/L小鼠雄性4周龄颈部脱臼处死，在 75%酒精浸泡 10 min。②放置于无菌培养皿内移入超净工作台，无菌条件下取其双侧股骨与胫骨，在装有DMEM/F12 的培养皿内将骨表面附有的肌肉及肌筋膜等剔除干净，两端剪断暴露骨髓腔。③ 5ml注射器穿刺干骺端，用 DMEM/F12培养基冲洗骨髓腔直至冲出液清亮为止，收集冲洗下来的骨髓细胞悬液于无菌离心管中，充分吹打混匀后制成单细胞悬液。1000 r /min 离心5 min，弃上清，以含 10 %胎牛血清的DMEM/F12 完全培养基重悬细胞，接种至6cm塑料培养皿，置于37 ℃、5 % CO2、饱和湿度培养箱中培养。48h 后，弃除悬浮细胞，加入新鲜培养基继续培养，2－3d 换液1 次，至贴壁细胞80%-90%融合后（大概1周），以含0.01%EDTA 的0.25％胰蛋白酶消化，进行传代培养。 1.5 MSC的传代培养及细胞形态学观察 每日在倒置相差显微镜下观察细胞形态和贴壁情况。 原代细胞生长达80%~90%时，吸净培养瓶中的液体， PBS洗涤 2次，取 37℃预热过的 0.25 %胰酶 1mL，于 37℃恒温消化 2min。镜下观察细胞见细胞从梭形变为圆形，以 10%胎牛血清的 DMEM培养基终止消化，吹打细胞，使细胞完全从培养瓶中脱落并吹打成单细胞悬液。吸取细胞悬液至 15 mL的离心管中， 1 000 r/min离心 5 min，移去上清，见离心管底部一层白色沉淀，加入 DMEM/F12培养液，制成单细胞悬液。原代细胞按 1:2比例传代培养。 问题：细胞已传至第二代（培养时间10天）， 但发现生长缓慢，不知道是什么原因导致。 而且 那细胞形态不知道是不是MSC呀，有老师说大部分都不是MSC。我顿觉悲催呀~~有没虫友能告诉我哪些是MSC呀  001003.png |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有69人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 从骨髓中分离造血干细胞
已经有10人回复
- 用流式细胞仪检测小鼠骨髓细胞周期，求骨髓细胞固定步骤
已经有4人回复
- 【推荐】973 三维培养干细胞自我更新与定向分化的调控网络
已经有9人回复
2楼2014-05-12 14:12:13
