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化合物分离、纯化
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【请教】：用微生物发酵获得了其次级代谢产物，现在要将其中的化合物都分离纯化出来并鉴定他们的结构，有做这一块的吗？分离的过程都有哪些（过哪些柱子以及顺序）的。 |
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2楼2013-08-22 10:02:02
【答案】应助回帖
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飞飞-笑笑: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-23 17:32:29
飞飞-笑笑: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-23 17:32:29
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《狗尾草平脐蠕孢NY1 菌株的次级代谢产物分析》 文献 每瓶大米发酵物加 200mL 乙酸乙酯浸泡 1d ， 取 上 层 乙 酸 乙 酯 相 ， 用 旋 转 蒸 发 仪 （N-1100D，上海爱朗仪器有限公司）40℃下蒸 干得到褐色油状粗提物。用上述方法对大米发 酵物重复提取 3 次，合并粗提物。加 1–1.5 倍 100–200 目硅胶于粗提物中，搅拌均匀后倒入 减压柱中，用石油醚:乙酸乙酯（90:10，85:15， 80:20，75:25，70:30，65:35，60:40）和纯甲醇 梯度洗脱，得到不同极性的组分。用薄层层析 法（TLC）对每个组分进行分析，根据化合物 在薄层层析板（GF 254，青岛海洋化工有限公司） 上的极性大小和成点性来选择合适的洗脱剂对 欲分离化合物反复纯化，纯化方法主要为硅胶 柱层析（200–300 目，青岛海洋化工有限公司） 和凝胶柱层析（Sephadex LH-20、Sephadex LH-60，瑞典 Amersham Biosciences 公司）。化 合物的鉴定主要依据核磁共振（AVANCE Ⅲ 600Hz，德国 Bruker 公司，氘代试剂为 CDCl 3、 acetone-d 6）和质谱（Apex-Ultra 7.0 T，德国 Bruker 公司）数据。 每种微生物的代谢产物的分离过程是不同的，你最好还是贴出微生物的种类。去谷歌学术上搜索中英文就出来了 |
3楼2013-08-22 10:03:44
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谢谢你的介绍哈！ 我这菌株是收集自福建厦门一片红树林里的真菌，命名为BY1，前期的发酵使其得次级代谢产物已经做过了。之后是用的乙酸乙酯：甲醇：乙酸=80:15:5的比例进行的浸提，浸提后旋蒸称重。然后过的中压型液相（填料是C18），用甲醇：蒸馏水=100:0、70:30、50:50、30:70以及0:100的几个梯度洗脱。洗脱后的的每一个梯度再用的葡聚糖凝胶柱（流动相甲醇或丙酮）和硅胶柱进行的分离。但是正常在过硅胶柱时薄层板上的点板只显示一个或两个的时候才比较好去用硅胶柱去分离的，而我苦恼的是过完凝胶柱后用薄层板分析时，往往是3-4个化合物。所以我想找另一种方法能再细分一下的。所以才求请教的~ 看了你的回复后，感觉其实纯化的步骤是同步的只是有些细节不太相同。 很感激啊  !!!!!!!!!!!! |
4楼2013-08-23 17:26:51
