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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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echochen1017

新虫 (初入文坛)

[求助] 完整6000左右大质粒上定点突变一个基因,用Dpni消化的整个过程

想在6000 左右的大质粒上定点突变一个基因,拟用DpnI消化模板,想请教大神们,这个过程怎么设计?要注意的事项是什么呢?
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echochen1017

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-20 16:09:41
设计Quickchang突变引物,然后以质粒为模板,进行全质粒PCR,阳性PCR产物取20ul,直接加1ulDpnI消化模板除去模板,灭活后转化宿主细胞。

消化后需要再跑电泳纯化吗?还是消化液直接转化宿主细胞
4楼2013-08-22 10:29:28
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wanggl2004

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-20 11:35:21
直接设计互补引物,用quicchange去突变,pcr产物经电泳确认直接DpnI消化后再回收,然后转化大肠杆菌,挑菌落抽质粒验证
思考是行动的种子!
2楼2013-08-20 10:44:32
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-20 18:26:22
设计Quickchang突变引物,然后以质粒为模板,进行全质粒PCR,阳性PCR产物取20ul,直接加1ulDpnI消化模板除去模板,灭活后转化宿主细胞。
3楼2013-08-20 16:09:41
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by echochen1017 at 2013-08-22 10:29:28
消化后需要再跑电泳纯化吗?还是消化液直接转化宿主细胞...

我们是消化液直接转化宿主细胞。
5楼2013-08-22 10:51:50
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