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云中鸿雁

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母菌培养

如何从菌剂中分离出纯的酵母菌啊!固体培养基,半固体培养基,都试过了,培养不出来,急急急!求帮助1
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


laozuzunzhe: MicEPI+1, good! 2013-09-16 10:35:38
依你描述和回帖的情况,个人认为,主要原因是你的菌剂中含有的酵母菌不是优势菌;另外活性也不够。个人建议如下操作:

1. 富集培养:利用富营养培养基如LB,牛肉膏,蛋白胨等。

2. 传代培养,保证活性:仍采用富营养培养基,分出5个平行,传代2~3次。

3. 优势菌株初筛:继续传代培养,逐渐增加氨苄抗性浓度,氨苄对真菌无效。

4. 酵母菌复筛:利用YPD,MD(需补足必要成分)等培养基进行复筛,扩大培养。

5. 平板涂布培养,逐级稀释,获得单菌落。

6. 划线分离,得到纯化的酵母野生菌。

个人见解,仅供参考。

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15楼2013-09-13 12:16:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

破网

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

先使用液体培养,就是普通的YPD培养基或者是麦芽汁培养基,摇床培养,培养时间,24小时长了的话就可以涂布或者斜面,如果没长,时间可以延长到48小时或者72小时。如果还是不长,那基本就是挂了。

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go
7楼2013-08-23 12:10:11
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wangl2037

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助! 2013-09-13 17:25:26
首先,你的菌剂中有没有酵母菌,你得做镜检查。
其次,一般来说酵母菌是还是比较好培养的,你是不是稀释倍数太高了?还是你的菌剂里面压根就保藏有问题,挂了?
你可以先摇床活化24h,再从里面吸取0.2ml涂布平板,挑取单菌落划线分离几次,应该能分离到的,如果里面确定有酵母的话。
希望采纳~

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2013-08-23 11:35:46
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普通回帖

水的逻辑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励新虫 2013-08-22 10:15:40
首先你确定有没有,可以做下镜检。然后梯度稀释下,涂布平板一般没问题的
2楼2013-08-21 16:37:58
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定有酵母后,稀释浓度梯度涂平板,挑单菌落就可以了
3楼2013-08-22 09:02:17
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wuxiyong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓度梯度稀释,平板涂布,挑纯的单菌落多培养几次!
4楼2013-08-22 10:08:58
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大鱼小心

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

何为培养不出来,是什么都不长,还是长的都不是?

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5楼2013-08-23 10:02:34
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云中鸿雁

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 破网 at 2013-08-23 12:10:11
先使用液体培养,就是普通的YPD培养基或者是麦芽汁培养基,摇床培养,培养时间,24小时长了的话就可以涂布或者斜面,如果没长,时间可以延长到48小时或者72小时。如果还是不长,那基本就是挂了。

菌剂中什么微生物都有,在YPD或PDA培养中,我想抑制细菌的生长,加入氨苄青霉素(100mg/ml),结果在最初的24h内什么都不长,之后偶尔长出几个,经过镜检,不是酵母菌;之后换了同样浓度的氯霉素,结果依然如此,怎么回事?
8楼2013-09-13 10:20:09
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云中鸿雁

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangl2037 at 2013-08-23 11:35:46
首先,你的菌剂中有没有酵母菌,你得做镜检查。
其次,一般来说酵母菌是还是比较好培养的,你是不是稀释倍数太高了?还是你的菌剂里面压根就保藏有问题,挂了?
你可以先摇床活化24h,再从里面吸取0.2ml涂布平板, ...

菌剂中经过镜检,含有酵母菌;
菌剂保存应该没有问题,因为细菌可以分离出来;
我也试过摇床活化,不行
9楼2013-09-13 10:22:18
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破网

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 云中鸿雁 at 2013-09-13 10:20:09
菌剂中什么微生物都有,在YPD或PDA培养中,我想抑制细菌的生长,加入氨苄青霉素(100mg/ml),结果在最初的24h内什么都不长,之后偶尔长出几个,经过镜检,不是酵母菌;之后换了同样浓度的氯霉素,结果依然如此,怎 ...

你确定你有酵母?
go
10楼2013-09-13 10:22:50
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