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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于POD酶数据的处理，急急急~~~
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lele86hao

新虫 (小有名气)

[求助] 关于POD酶数据的处理，急急急~~~

采用愈创木酚法测定POD的活性，每1min测定一次，共测定5min的OD值，可是有些OD值随着时间增大，有些是减小，这是什么原因呢，请高手赐教
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努力
1楼 2013-08-19 20:01:59
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 最好列出你的详细实验步骤
2 愈创木酚法测定，酶活性变化为S型曲线，应选择其中平滑部分记录测定
3 试验用过氧化氢临用前配置
4 调零时用磷酸盐缓冲液代替酶液
5 适当加大样品酶液添加量
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2楼2013-08-20 02:52:28
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lele86hao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-08-20 02:52:28
1 最好列出你的详细实验步骤
2 愈创木酚法测定，酶活性变化为S型曲线，应选择其中平滑部分记录测定
3 试验用过氧化氢临用前配置
4 调零时用磷酸盐缓冲液代替酶液
5 适当加大样品酶液添加量

2.9ml  0.05mol/L磷酸缓冲液
0.5 ml 2%过氧化氢
0.1ml  2%愈创木酚溶液
0.1ml酶液
s型？？？不是线性吗 选择平滑部分记录还能有差异吗
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努力
3楼2013-08-21 21:03:22
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lele86hao at 2013-08-21 21:03:22
2.9ml  0.05mol/L磷酸缓冲液
0.5 ml 2%过氧化氢
0.1ml  2%愈创木酚溶液
0.1ml酶液
s型？？？不是线性吗 选择平滑部分记录还能有差异吗...

如果你有可以连续读数的分光光度仪并绘制吸光度曲线，你会发现吸光度变化是一个S型曲线，我指的平滑部分是指中间呈直线上升的部分。

你的反应体系没什么问题，缓冲液pH一般为6即可，可以考虑加大酶液用量，另外，为了检测整个酶活检测系统是否有问题，可以配一点任意浓度HRP溶液，替代酶液，看看能否通过反应使溶液变色。
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4楼2013-08-21 21:21:35
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xxd153025415

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-08-21 21:21:35
如果你有可以连续读数的分光光度仪并绘制吸光度曲线，你会发现吸光度变化是一个S型曲线，我指的平滑部分是指中间呈直线上升的部分。

你的反应体系没什么问题，缓冲液pH一般为6即可，可以考虑加大酶液用量，另外 ...

它会不会有个颜色的变化呢？
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5楼2015-05-15 20:38:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xxd153025415 at 2015-05-15 20:38:01
它会不会有个颜色的变化呢？...

得非常高浓度才能看到颜色变化
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6楼2015-05-15 21:17:33
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