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中华魂4466

银虫 (初入文坛)

[求助] TNF-α的检测方法 已有1人参与

各位师哥师姐好,我是新人呐。现在我师姐让我买引物测TNF-α,对象是小鼠脑血管。TNF-α不是RNA也不是DNA,是蛋白,怎么用引物做PCR?望高手指点些啊!
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没有过不去的坎,回头一下继续向前!
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kevin_1990

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

TNF-a有其对应的mRNA片段,提取RNA,合成cDNA,进行扩增,做定量PCR,看基因表达水平
5楼2015-04-12 15:59:40
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seawind121

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
中华魂4466: 金币+5, ★★★很有帮助, 有点明白了 2013-08-20 22:58:19
做半定量RT-PCR 或者qRT-PCR. 提取细胞的RNA反转录成cDNA,用你合成的引物做PCR检测即可。
2楼2013-08-20 00:29:11
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中华魂4466

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by seawind121 at 2013-08-20 00:29:11
做半定量RT-PCR 或者qRT-PCR. 提取细胞的RNA反转录成cDNA,用你合成的引物做PCR检测即可。

首先谢谢你的回答,接着还是这个问题,鼠TNF-α对应的引物是什么?有商家卖这种引物吗?还是得自己合成?
没有过不去的坎,回头一下继续向前!
3楼2013-08-20 23:06:00
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seawind121

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 中华魂4466 at 2013-08-20 23:06:00
首先谢谢你的回答,接着还是这个问题,鼠TNF-α对应的引物是什么?有商家卖这种引物吗?还是得自己合成?...

鼠TNF-α的cDNA因序列可以自己在NCBI里查到,查到后就可以自己设计合成上游和下游引物了,设计好后 让公司帮你合成就好了。然后用你合成的引物做pcr.
4楼2013-08-21 05:30:13
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