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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 令我崩溃的TA克隆，老是连不上
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锦青

铁虫 (初入文坛)
不知道楼主，是怎么解决的呢，我现在也是连了快大半年了，还是连不上，都快愁死了，求解决的办法？？？跪谢
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happy everyday
31楼2013-12-13 20:50:34
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三蛰

铜虫 (小有名气)
看来TA克隆真受欢迎
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我不会！
32楼2013-12-13 21:51:32
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xinmengfeng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by huguangdong at 2013-08-13 12:21:57
1 首先确认你这个2*ES taq酶是高保真酶还是普通TAQ聚合酶，如果是高保真酶，PCR扩增产物为平末端，需要加A处理才能进行TA克隆，否则肯定失败，如果是TAQ酶可以直接操作。
2 看你的描述，连接温度应该没有问题，一般 ...

你好，我想请问你，加A尾，可不可以直接用普通的taq酶mix加尾，如果可以，条件的是怎样的

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33楼2016-10-24 14:23:52
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墨与成长

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by changes at 2013-08-13 12:12:51
因为你的目的片段约2000bp，载体大小月2700bp。T/A克隆的效率应该不是很高，另外你提到回收的条带非常亮比marker的浓度都高，要注意减少片段的量了，可能1:6的比例不是很合适，目的片段浓度高了，影响连接的效率。
...

若是条带较长为4600，会导致连接效率降低吗。最近在做TA克隆总是连不上，短片段没问题，长一点的就一直连不上去，一直是一些短片段，虽然也是我的目的片段，但是不完整是什么原因呢
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34楼2018-10-11 18:53:18
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