11楼: Originally posted by huguangdong at 2013-08-13 12:21:57
1 首先确认你这个2*ES taq酶是高保真酶还是普通TAQ聚合酶，如果是高保真酶，PCR扩增产物为平末端，需要加A处理才能进行TA克隆，否则肯定失败，如果是TAQ酶可以直接操作。
2 看你的描述，连接温度应该没有问题，一般 ...

10楼: Originally posted by changes at 2013-08-13 12:12:51
因为你的目的片段约2000bp，载体大小月2700bp。T/A克隆的效率应该不是很高，另外你提到回收的条带非常亮比marker的浓度都高，要注意减少片段的量了，可能1:6的比例不是很合适，目的片段浓度高了，影响连接的效率。
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