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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ni柱纯化问题
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gelois

金虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-14 18:49:32
怎么正好反过来呢。呵呵，我们离子柱用tris...

其实一般都是用Tris的，只有在Tris分离杂蛋白的效果不好的时候，才会尝试用磷酸缓冲液。
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21楼2013-08-15 09:08:50
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xuexie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-14 14:47:12
哦，这样伤柱的吧。谢谢...

所以是在柱下，用1.5mlEP管装少量填料直接试验的。EDTA几乎可以除掉所有残留蛋白及变性蛋白，算是对柱子再生吧，应该不会伤柱子的。
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22楼2013-08-15 09:44:58
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-14 13:53:51
样品和Ni过夜结合还是样品和ni柱？不是说需要一定氯化钠吗？我用的是300mM的Nacl，高吗？...

将样品和Ni柱过夜结合。300mM的NaCl不高，我用的也是那个浓度。
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想你没话说
23楼2013-08-15 10:58:15
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929519755

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-14 13:55:28
我用低浓度洗脱就可以将我目的蛋白和杂蛋白一起洗下来，我可以选择梯度洗脱吗，谢谢...

可以啊  告诉你怎么弄
用20mM咪唑漂洗25ml 收集样品，只用收集三管，分别从开始、中间、和结束时收集。
用30mM咪唑漂洗25ml 收集样品，只用收集三管，分别从开始、中间、和结束时收集。
用40mM咪唑漂洗6mL收集样品，这一次把这6ml都分管收集了，每管1ml。
然后拿去跑胶，看看效果。
如果 你的目的蛋白在低浓度就可以洗脱下来的话，那么用40mM咪唑洗脱收集的样品也够了……
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想你没话说
24楼2013-08-15 11:05:15
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鸡鸣不已

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 929519755 at 2013-08-15 11:05:15
可以啊  告诉你怎么弄
用20mM咪唑漂洗25ml 收集样品，只用收集三管，分别从开始、中间、和结束时收集。
用30mM咪唑漂洗25ml 收集样品，只用收集三管，分别从开始、中间、和结束时收集。
用40mM咪唑漂洗6mL收集样 ...

我的意思是用梯度混合器
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25楼2013-08-15 16:36:48
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-06 15:23:34
再生了，还是有穿过，且低浓度咪唑就部分洗下来了。柱子柱材有3.5ml左右，按说明书上每1ml可吸附20mg蛋白，应该完全可以吸附的呀。你说我可以将柱材和样品混匀颠倒过夜，第二天再装柱吗，谢谢...

不要过夜，可能杂蛋白吸附较多，4摄氏度混匀1小时较好
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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
26楼2014-03-27 14:37:48
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终朝采露

新虫 (初入文坛)
楼主，我现在的情况和你一样，我用的是预装柱，你的问题现在解决了吗？可否帮我解决下，谢谢。
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青春是一本太仓促的书；
27楼2014-11-17 11:22:30
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tevejdey

禁虫
本帖内容被屏蔽
28楼2022-08-03 15:05:06
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