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ni柱纯化问题已有1人参与
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大家好，我最近用金斯瑞的Ni柱纯化我的蛋白（带His6），上样过程会穿过挺多，吸附也较弱（说明书上的缓冲液 Lysis Equilibration Buffer (LE buffer): 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0 Wash Buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0 Elution buffer: 50 mM NaH 2 PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0 就是用10mM咪唑洗杂，我用10mM咪唑基本洗脱了），想问大家，Ni柱有哪些上样方式，可以把柱材和我样品混匀过夜，第二天装柱吗？大家平时还用什么缓冲液效果好，谢谢大家 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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【答案】应助回帖
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鸡鸣不已(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-08-14 13:15:40
鸡鸣不已: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-08-14 14:48:57
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| 我做的也是金斯瑞的镍柱，用的是0.02M Tris-Hcl+0.25M Nacl平衡后高盐除杂。同学也遇到过一样不挂柱的问题，重复几次后怀疑是由于HIS标签被蛋白包裹，没有暴露，所以无法充分挂柱。你可以用1.5mlEP管，装一些填料在柱下试验，同样用缓冲液平衡后上样，充分混匀后离心，再用EDTA洗脱，这样试验会节省时间。希望对你有帮助 |
9楼2013-08-12 16:15:29
16楼2013-08-14 14:31:32
22楼2013-08-15 09:44:58