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Mr泡面

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC梯度洗脱有杂峰

小弟在做中药复方的指纹图谱,用的是C18柱,流动相为乙腈:0.1%的磷酸缓冲盐。梯度为:0-23min(乙腈5-19%),23-33min(乙腈19-22%),33-48min(乙腈22-32%),48-60min(乙腈32-75%),60-61min(乙腈75-80%),61-66min(乙腈80%),66-78min(乙腈80-5%),78-80min(乙腈5%)。进标准品的时候发现,标准品中有好多的杂质峰,出现在各个时间段。单独进了溶剂和空白都有类似的杂峰出现。换了柱子之后还是会出现杂峰。柱子也都冲洗过了。请问下哪位知道有哪些原因造成这种情况。
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Tony_young

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我实验室的也是P680
第一,本来跑梯度多多少少都会有一点杂峰,只要不是很明显的话,影响不大,本来梯度基线都在飘,要是梯度大的话飘的更厉害。
第二,进一针纯甲醇,对比标准品溶液的图,看看杂峰的位置和大小,如果有重复出现的现象,那就是仪器的问题了,可能是仪器的管路系统。解决办法  1,用纯甲醇清洗定量环。2,用纯甲醇冲整个管路系统。3,吸收池脏了,之前做实验进样过浓,吸收池、管路系统会沾有一些,没有冲干净。这个的话,一般是吸收池,要找工程师来解决了。

如果纠结不知道怎么办的话,就直接打电话问工程师,其实你花了钱买了仪器,戴安的都是终生免费维修的,工程师打电话问问题,又不收费,只是换零件收钱罢了。有一些问题,多跟他们交流一下,真的会学到很多东西的
11楼2013-08-05 22:59:37
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suruiqin

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr泡面: 金币+3, 有帮助, 但是我进的是标准品,而且要做得是新药申报的资料,标准品中有杂质峰是不是说不过去? 2013-08-05 14:24:17
个人觉得是梯度峰,我做实验时就出现梯度峰,但是如果不影响实验可以不用管它
所有的成就都源于新的挑战
2楼2013-08-05 13:39:29
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suruiqin

版主 (知名作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by suruiqin at 2013-08-05 13:39:29
个人觉得是梯度峰,我做实验时就出现梯度峰,但是如果不影响实验可以不用管它

你附上空针的图,就可以说明了
所有的成就都源于新的挑战
3楼2013-08-05 14:25:37
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jgy2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度用有机相一定要用进口的,国产的不行

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-08-05 15:37:00
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