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月光边境678

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr反应体系为何要加Mg离子 已有8人参与

PCR反应体系中为何要加Mg离子?
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
更正10楼的内容:调整镁离子浓度时,可以与dNTP正相关的梯度调整,两者同方向分梯度调节,一般不要反方向调节;但是可以单独镁离子浓度,而dNTP浓度不动;有时候dNTP浓度调整不大时也可以不动镁离子浓度,因为镁离子浓度太高了,可能会增加非特异性扩增,或者有时候就是可以不动dNTP浓度而只调节镁离子浓度也能够增加PCR的专一性。

我参考了yujitianqing的帖子, 过去我没有注意到,而后我去查阅了文献,有的文献与yujitianqing的帖子的内容基本上一致,也有些文献与yujitianqing的帖子的内容不一致。
11楼2013-08-07 12:21:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

Mg离子是DNA聚合酶的金属辅因子,必须要加
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-08-04 17:06:13
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来! 2013-08-04 22:01:10
Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性,一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整,同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。

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3楼2013-08-04 20:17:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 13:38:41
gyesang: 回帖置顶 2013-08-05 13:38:47
楼上朋友都说了,我补充点。一般商业化的DNA聚合酶有两种buffer,一种加了镁离子,一种没加(镁离子有单独的一管),前者是方便使用,适合通常的PCR反应;后者是让用户可以调节镁离子浓度。
镁离子浓度高,扩增效率就高,但是特异性会下降;镁离子浓度低,扩增效率会下降,但是特异性会提高。换句话说,如果PCR扩增不出来,可以适当提高镁离子浓度;如果PCR有杂带,可以尝试降低镁离子浓度。

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5楼2013-08-05 11:03:56
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