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月光边境678

新虫 (初入文坛)

[交流] pcr反应体系为何要加Mg离子 已有8人参与

PCR反应体系中为何要加Mg离子？
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1楼 2013-08-04 15:00:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by yujitianqing at 2013-08-04 20:17:34
Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性，一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影 ...

"在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度",这个问题，我过去没有注意到。
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10楼2013-08-07 12:11:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
Mg离子是DNA聚合酶的金属辅因子，必须要加
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-08-04 17:06:13
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
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amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来！ 2013-08-04 22:01:10
Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性，一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度
Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
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凌波丽
3楼2013-08-04 20:17:34
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-05 13:38:41
gyesang: 回帖置顶 2013-08-05 13:38:47
楼上朋友都说了，我补充点。一般商业化的DNA聚合酶有两种buffer，一种加了镁离子，一种没加（镁离子有单独的一管），前者是方便使用，适合通常的PCR反应；后者是让用户可以调节镁离子浓度。
镁离子浓度高，扩增效率就高，但是特异性会下降；镁离子浓度低，扩增效率会下降，但是特异性会提高。换句话说，如果PCR扩增不出来，可以适当提高镁离子浓度；如果PCR有杂带，可以尝试降低镁离子浓度。
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月光边境678
5楼2013-08-05 11:03:56
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