应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切连接
91/1返回列表
查看: 1359  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切连接 已有5人参与

做双酶切为以后的的连接做准备时，回收目的片段应用TBA还是TAE?为什么？我的载体和目的片段的大小比为10:1，请问我要怎么设置两者的摩尔比？连接的体系是什么？10微升还是20微升？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-08-02 11:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

dulei

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-08-02 16:40:08
gyesang: 回帖置顶 2013-08-02 16:40:09
回收用TAE就可以，切胶的时候尽可能快，不要紫外下暴露太长时间。片段过小或过大都会造成连接效率的下降，最佳摩尔比是1:3，可以适当放宽范围。最重要的一点是载体和片段要尽可能浓一些，这样连接效率才高。10ul体系足够。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-02 15:12:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-02 12:53:47
TAE缓冲液啊摩尔比1:5吧 载体少些，基因多些，10微升就够了
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-08-02 12:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dulei at 2013-08-02 15:12:51
回收用TAE就可以，切胶的时候尽可能快，不要紫外下暴露太长时间。片段过小或过大都会造成连接效率的下降，最佳摩尔比是1:3，可以适当放宽范围。最重要的一点是载体和片段要尽可能浓一些，这样连接效率才高。10ul体系 ...

为什么不用TBA？
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-03 20:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-08-02 12:24:23
TAE缓冲液啊摩尔比1:5吧 载体少些，基因多些，10微升就够了

为什么不用TBE啊？？
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-04 13:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-04 13:15:12
为什么不用TBE啊？？...

TBE一般跑PAGE胶的时候用
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-08-04 17:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高洁琼

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-14 17:55:34
TAE buffer回收，载体和目的片段的摩尔比一般是1：3到1:10之间都可以。连接体系可以根据你的连接酶而定。我以前用的连接酶体系是20微升，现在换个厂家的T4连接酶，用的是15微升体系。
赞一下 回复此楼
Nothing~seek,nothing~find.
7楼2013-08-04 18:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都行，失败几次就会了。这个技术是很成熟的
赞一下 回复此楼
8楼2013-08-05 13:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 高洁琼 at 2013-08-04 18:34:02
TAE buffer回收，载体和目的片段的摩尔比一般是1：3到1:10之间都可以。连接体系可以根据你的连接酶而定。我以前用的连接酶体系是20微升，现在换个厂家的T4连接酶，用的是15微升体系。

我的两个连接片段浓度约6.0纳克/微升，我配的10微升连接体系，1微升T4连接酶，1微升10倍连接buffer，其他8微升加我的两个目的片段。可就是热击转化后不长菌，我在找原因，能不能帮忙分析一下？？谢谢！！
赞一下 回复此楼
9楼2013-08-14 14:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 33ggdf 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 3/150 2026-11-02 01:00 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 4/200 2026-11-02 00:50 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-02 00:47 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:37 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-02 00:29 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 00:21 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-02 00:15 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 23:58 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 23:55 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:24 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-01 22:05 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 16:58 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 16:52 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +9 zuesli 2026-10-27 15/750 2026-11-01 12:59 by Equinoxhua
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 4/200 2026-11-01 11:01 by BCdvBAEpt3zm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭