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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切连接
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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切连接 已有5人参与

做双酶切为以后的的连接做准备时，回收目的片段应用TBA还是TAE?为什么？我的载体和目的片段的大小比为10:1，请问我要怎么设置两者的摩尔比？连接的体系是什么？10微升还是20微升？
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1楼 2013-08-02 11:51:14
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dulei

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-08-02 16:40:08
gyesang: 回帖置顶 2013-08-02 16:40:09
回收用TAE就可以，切胶的时候尽可能快，不要紫外下暴露太长时间。片段过小或过大都会造成连接效率的下降，最佳摩尔比是1:3，可以适当放宽范围。最重要的一点是载体和片段要尽可能浓一些，这样连接效率才高。10ul体系足够。
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3楼2013-08-02 15:12:51
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-02 12:53:47
TAE缓冲液啊摩尔比1:5吧 载体少些，基因多些，10微升就够了
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我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-08-02 12:24:23
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dulei at 2013-08-02 15:12:51
回收用TAE就可以，切胶的时候尽可能快，不要紫外下暴露太长时间。片段过小或过大都会造成连接效率的下降，最佳摩尔比是1:3，可以适当放宽范围。最重要的一点是载体和片段要尽可能浓一些，这样连接效率才高。10ul体系 ...

为什么不用TBA？
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4楼2013-08-03 20:05:32
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-08-02 12:24:23
TAE缓冲液啊摩尔比1:5吧 载体少些，基因多些，10微升就够了

为什么不用TBE啊？？
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5楼2013-08-04 13:15:12
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