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maple032023铜虫 (初入文坛)
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[求助]
P450BM3表达
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从巨大芽孢杆菌中克隆P450BM3基因，表达质粒pET-22b，表达菌株E.coli BL21，重组菌构建成功，测序正确。表达体系为TB培养基加入各种金属离子，IPTG诱导表达24h，超声破碎得粗酶液SDS检测没有目的条带，用NADPH方法检测也显示没有活性。怀疑可能是没有表达出来，原因不确定。是表达质粒有问题？还是表达菌株？表达过程中我没有加氨基乙酰丙酸，是不是也有影响？ 第一次做P450，请大家多多帮忙。如果有朋友做过P450BM3表达并有成熟的protocol可以跟我分享一下的话我将不胜感激。 |
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