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求助纳豆激酶测定方法 已有1人参与
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网上都传用ASTRUP的纤维蛋白平板法，但是具体的操作还有有点疑惑，想请教下大神具体如何操作呢？？ |
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释天1
铜虫 (小有名气)
- 应助: 11 (小学生)
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- 散金: 5
- 帖子: 79
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 1465946
- 注册: 2011-10-29
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
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(1)试剂0．01mol／L磷酸盐缓冲液(pH7．8) 取磷酸氢二钠3．58g，加水 使溶解并稀释至1000mL为A液；取磷酸二氢钠(NaH PO ·2H 0)0．78g，加水使溶解并稀释至500mL为B 液；将A、B两液混合至pH值为7．8。 工作溶液取0．01 mol／L磷酸盐缓冲液(pH7．8)与0．9％氯化钠溶液(1：17)混合。 1．5％琼脂糖溶液取琼脂糖1．5g，加工作溶液100mL加热溶解。 纤维蛋白原溶液取纤维蛋白原适量，加工作溶液制成每lmL中含1．5mg的可凝蛋白溶液。 凝血酶溶液取凝血酶，加0．9％氯化钠溶液制成每1mL中含1 BP单位的溶液。 (2)标准品溶液的制备 取蚓激酶标准品，用0．9％氯化钠溶液制成浓度分别为每lmL中含10000， 8000，6000，4000，2000蚓激酶单位的溶液。 (3)供试品溶液的制备取本品适量，加0．9％氯化钠溶液使溶解并稀释成标准曲线范围内的浓度。 (4)测定法取纤维蛋白原溶液39mL，置烧杯中，边搅拌边加入55℃琼脂糖溶液39mL、凝血酶溶液 3．0mL，立即混匀，快速倒入直径14cm塑料培养皿中，室温水平放置1小时，打孔。精密量取不同浓度的蚓 激酶标准品溶液及供试品溶液各10 ，分别点在同一平皿中，加盖，置37℃恒温箱中反应18小时。取出后 用卡尺测量溶圈垂直两直径，以蚓激酶标准品单位数的对数为横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计 算回归方程，将供试品垂直两直径乘积的对数代人回归方程，计算供试品效价单位数。标准品与供试品应各 做两点，以平均值计算。 |
2楼2014-04-17 08:47:50
3楼2015-12-09 21:31:44
