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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 求助纳豆激酶测定方法
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jsbyrt

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助纳豆激酶测定方法 已有1人参与

网上都传用ASTRUP的纤维蛋白平板法，但是具体的操作还有有点疑惑，想请教下大神具体如何操作呢？？
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向上突破无限可能
1楼 2013-08-01 09:09:02
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释天1

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

(1)试剂0．01mol／L磷酸盐缓冲液(pH7．8) 取磷酸氢二钠3．58g，加水
使溶解并稀释至1000mL为A液；取磷酸二氢钠(NaH PO ·2H 0)0．78g，加水使溶解并稀释至500mL为B
液；将A、B两液混合至pH值为7．8。
工作溶液取0．01 mol／L磷酸盐缓冲液(pH7．8)与0．9％氯化钠溶液(1：17)混合。
1．5％琼脂糖溶液取琼脂糖1．5g，加工作溶液100mL加热溶解。
纤维蛋白原溶液取纤维蛋白原适量，加工作溶液制成每lmL中含1．5mg的可凝蛋白溶液。
凝血酶溶液取凝血酶，加0．9％氯化钠溶液制成每1mL中含1 BP单位的溶液。
(2)标准品溶液的制备 取蚓激酶标准品，用0．9％氯化钠溶液制成浓度分别为每lmL中含10000，
8000，6000，4000，2000蚓激酶单位的溶液。
(3)供试品溶液的制备取本品适量，加0．9％氯化钠溶液使溶解并稀释成标准曲线范围内的浓度。
(4)测定法取纤维蛋白原溶液39mL，置烧杯中，边搅拌边加入55℃琼脂糖溶液39mL、凝血酶溶液
3．0mL，立即混匀，快速倒入直径14cm塑料培养皿中，室温水平放置1小时，打孔。精密量取不同浓度的蚓
激酶标准品溶液及供试品溶液各10 ，分别点在同一平皿中，加盖，置37℃恒温箱中反应18小时。取出后
用卡尺测量溶圈垂直两直径，以蚓激酶标准品单位数的对数为横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计
算回归方程，将供试品垂直两直径乘积的对数代人回归方程，计算供试品效价单位数。标准品与供试品应各
做两点，以平均值计算。
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2楼2014-04-17 08:47:50
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小菲菲
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发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-09 21:31:44
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