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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)

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专业: 电化学分析

[求助] 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办

各位虫虫好，我最近在做原核表达蛋白，用的标签是HIS-tag，发现标签无论是在N端还是在C端，蛋白折叠时都把它折进去了，纯化不了。我现在想的是是不是可以让蛋白什么标签都不带，按分子量去分。我的方向本来是电化学的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道肿么办，求虫虫指点。

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春暖花开

1楼 2013-07-31 11:04:14

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roomofxw

木虫 (正式写手)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

时间来不及，更要实验更得设计的仔细了，多看看相关文献。
0.看起来酶活很重要，是否一定需要纯化的很纯
1.是酶的话，纯化前的粗酶液是否有活性？
2.纯化后不挂柱子的流穿是否有酶活？
3.可溶形式的聚集，可能是非共价键造成的聚集，尝试改变buffer是不是会起作用
4.变性可以挂柱，那尝试加入低浓度的变性剂是否可以纯化。纯化后是否还有活性，低浓度尿素缓慢透析能否比较容易的复性
5.蛋白分子量结构如何，是否需要形成二聚之类的，是否可以尝试复性
6.既然是酶，还有传感器，那你们测酶活会很容易。实验中从发酵开始多取样检测酶活，看看问题出在哪里