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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家做wb转膜时有没有发生这样的事？
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blueghost2

新虫 (小有名气)

[交流] 大家做wb转膜时有没有发生这样的事？

昨天同时跑了两块胶，上样的蛋白和量一模一样，，一块做湿转，一块用半干转。封闭，一抗一样二抗一样，总之除了转膜方法，其他条件完全一样。拍照的结果是：用半干转的显示了两条带，而湿转的是一条带。

ps：湿转设定：30v 400mA  实际达到30v 70mA左右，过夜
       干转设定：25v 65mA    实际达到10v 65mA   一个小时
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1楼 2013-07-30 15:58:29
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lugylucy

新虫 (初入文坛)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-02 21:56:31
我个人觉得跟你的目的蛋白的分子量有关系，分子量不同导致蛋白转过去的效率不一样。我之前查了一些资料：分子量大于100kDa的时候建议湿转，半干转不够稳定并且效率不高。但小分子的话半干转效果很好，我们实验室基本都是半干转。
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7楼2013-08-02 19:52:15
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-30 20:35:41
blueghost2: 金币+3 2013-08-02 12:00:19
就算是同一种转膜方法，最后得到的结果都有可能不一样，更何况转膜方法都不一样，有两条带的话通过大小判断呗
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2楼2013-07-30 18:43:03
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红飞侠

铁虫 (初入文坛)
★
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湿转的电流是不是太小啊，我们一般都是恒定电流是转的。
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3楼2013-08-02 14:05:46
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aoda123

木虫 (正式写手)
★
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湿转电流太小，而且你过夜转，可能把蛋白转过膜了
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5楼2013-08-02 15:06:39
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