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大家做wb转膜时有没有发生这样的事?
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blueghost2
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大家做wb转膜时有没有发生这样的事?
昨天同时跑了两块胶,上样的蛋白和量一模一样,,一块做湿转,一块用半干转。封闭,一抗一样二抗一样,总之除了转膜方法,其他条件完全一样。拍照的结果是:用半干转的显示了两条带,而湿转的是一条带。
ps:湿转设定:30v 400mA 实际达到30v 70mA左右,过夜
干转设定:25v 65mA 实际达到10v 65mA 一个小时
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blueghost2: 金币+3
2013-08-02 12:00:19
就算是同一种转膜方法,最后得到的结果都有可能不一样,更何况转膜方法都不一样,有两条带的话通过大小判断呗
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2楼
2013-07-30 18:43:03
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湿转的电流是不是太小啊,我们一般都是恒定电流是转的。
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2013-08-02 14:05:46
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湿转电流太小,而且你过夜转,可能把蛋白转过膜了
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5楼
2013-08-02 15:06:39
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2013-08-02 16:01:27
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lugylucy
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2013-08-02 21:56:31
我个人觉得跟你的目的蛋白的分子量有关系,分子量不同导致蛋白转过去的效率不一样。我之前查了一些资料:分子量大于100kDa的时候建议湿转,半干转不够稳定并且效率不高。但小分子的话半干转效果很好,我们实验室基本都是半干转。
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7楼
2013-08-02 19:52:15
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changyuan218
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