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ohmywenna

金虫 (著名写手)

[求助] 血清GC/MS谱峰求助

血清GC-MS代谢组学,方法如下,先加乙腈沉淀蛋白,100uL血清在氮气氛下吹干。衍生化方法如下,加80uL20mg/mL甲氧胺吡啶溶液,30℃水浴90min,然后加入80uLMSTFA,70℃下水浴60min,最后取上层清液转移至气相内插管做GC/MS。
空白:不加血清,试剂同上
GC/MS型号Agilent 7890A/5975C,参数如下,柱子DB-5MS
helium as the carrier gas at a constant flow rate of 1.0 mL/min. The temperature of injection, transfer interface, and ion source was set to 270, 260, and 200 °C, The GC temperature programming was set to 2 min isothermal heating at 80 °C, followed by 10 °C/min oven temperature ramps to 180 °C, 5 °C/min to 240 °C, and 25 °C/min to 290 °C, and a final 9 min maintenance at 290 °C.Electron impact ionization (70 eV) at full scan mode (m/z 30-600) was used, with an acquisition rate of 20 spectra
第一个图为空白试剂
第二个为血清。
从图谱上看这两张图看起来很像,貌似血清代谢物很少,请教大家一下是什么原因
血清GC/MS谱峰求助
血清GC/MS谱峰求助-1
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是衍生化问题,感觉样品处理和衍生化有问题   100uL血清在氮气氛下吹干 为什么要吹干, 而不直接衍生化处理呢,这样损失就会少一些。
用文字走路,用行动分析
2楼2013-07-29 16:40:13
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ohmywenna

金虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-07-29 16:40:13
是不是衍生化问题,感觉样品处理和衍生化有问题   100uL血清在氮气氛下吹干 为什么要吹干, 而不直接衍生化处理呢,这样损失就会少一些。

吹干主要是为了消除里边的水分,衍生化是不能有水的,那个MSTFA遇水就会马上分解
3楼2013-07-29 17:06:15
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笑盲虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ohmywenna: 金币+20, ★有帮助 2013-07-29 17:44:47
哦  明白    总体感觉仪器是没有问题的    但结果存在代谢组分偏少 ,则主要考虑是不是样品处理的问题,你可以做不同浓度的衍生化方法  看哪一个更好一些
用文字走路,用行动分析
4楼2013-07-29 17:28:38
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ohmywenna

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 笑盲虫 at 2013-07-29 17:28:38
哦  明白    总体感觉仪器是没有问题的    但结果存在代谢组分偏少 ,则主要考虑是不是样品处理的问题,你可以做不同浓度的衍生化方法  看哪一个更好一些

嗯,可能衍生化反应不彻底,再做做试试
5楼2013-07-29 17:44:22
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331220875

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by ohmywenna at 2013-07-29 17:44:22
嗯,可能衍生化反应不彻底,再做做试试...

我采用了和你类似的衍生化的方法,样本氮气吹干之后加入甲氧胺吡啶溶液反应2h后,样品瓶瓶壁上还有一层吹干后的样品,请问是怎么回事?还有就是在加入MSTFA之前,是否要吹干呢,有的文献上说要,而有的则没有?谢谢!
6楼2013-10-15 08:42:32
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ohmywenna

金虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 331220875 at 2013-10-15 08:42:32
我采用了和你类似的衍生化的方法,样本氮气吹干之后加入甲氧胺吡啶溶液反应2h后,样品瓶瓶壁上还有一层吹干后的样品,请问是怎么回事?还有就是在加入MSTFA之前,是否要吹干呢,有的文献上说要,而有的则没有?谢谢 ...

我们做的时候也出现过这个情况,像不溶的东西。在加入MSTFA之前我们是没有进行吹干的,直接加的衍生化试剂。衍生化之后再离心一下取上层清液
7楼2013-10-17 19:52:54
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元一妄

金虫 (小有名气)

问一下吡啶从哪里买,什么规格的,谢谢
妄
8楼2014-12-04 11:18:07
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