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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE凝胶电泳跑出来的条带问题
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-29 11:10:52
gyesang: 回帖置顶 2013-07-29 11:10:54
引用回帖:
10楼: Originally posted by 樱花稀砂 at 2013-07-28 13:23:07
可以请教一下配胶的方案吗？我怕我的错了，按方案上的AP和TEMED的量胶总是不凝，多加了才能凝...

貌似protocol应该没有区别。
关键AP要新配，附件中等20min让分离胶初步凝固已经算保守了。
我通常整块胶1个小时左右就完成了（10x8cm小胶，0.75或1mm厚不到一个小时，1.5mm厚会多等等），也可妥善保存过夜再用但不推荐。
加大用量会让聚合度下降，尽管可以凝固。
我喜欢现用现配，上午制胶跑胶，下午可以染色(快染法2hr就出结果）或Western。
如果用旧的AP通常要凝结好几个小时，甚至过夜，而且效果会变差。
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  • 附件 1 : Protocol#1-SDS-PAG(1).pdf
    • 2013-07-28 13:45:31, 96.83 K
11楼2013-07-28 14:19:00
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 樱花稀砂 at 2013-07-28 11:29:18
浓缩胶的时候电压是10Am，分离胶的时候电压是20Am，高了吗?...

我都是用电压跑的，浓缩胶80V，分离胶110V。10mA，电流的没用过，不好意思了
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12楼2013-07-28 15:42:45
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 樱花稀砂 at 2013-07-28 13:23:07
可以请教一下配胶的方案吗？我怕我的错了，按方案上的AP和TEMED的量胶总是不凝，多加了才能凝...

我有一个制胶的方案，需要的话可以发给你
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13楼2013-07-28 15:46:47
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主可以按照12楼的恒电压方法试试。
注意控制温度，别吝惜用冰块。
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14楼2013-07-28 17:01:43
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sometimess

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看起来严重弥散了，应该是胶凝结的问题，注意一下你配胶时间过硫酸铵没有潮解吧，夏天容易出现这个问题，
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15楼2013-07-28 17:09:20
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by spaceman_jia at 2013-07-28 14:19:00
貌似protocol应该没有区别。
关键AP要新配，附件中等20min让分离胶初步凝固已经算保守了。
我通常整块胶1个小时左右就完成了（10x8cm小胶，0.75或1mm厚不到一个小时，1.5mm厚会多等等），也可妥善保存过夜再用但 ...

AP一直是先用先配的，非常感谢，明天继续做一下！谢谢啦
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16楼2013-07-28 18:49:13
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 冷眼倦天涯 at 2013-07-28 15:42:45
我都是用电压跑的，浓缩胶80V，分离胶110V。10mA，电流的没用过，不好意思了...

恩呢，好的，谢谢
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17楼2013-07-28 18:50:34
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樱花稀砂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by spaceman_jia at 2013-07-28 17:01:43
楼主可以按照12楼的恒电压方法试试。
注意控制温度，别吝惜用冰块。

用的电压，浓缩胶80V，分离胶110V吗？
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18楼2013-07-28 19:02:40
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 樱花稀砂 at 2013-07-28 19:02:40
用的电压，浓缩胶80V，分离胶110V吗？...

这是很常见的条件。
我想最大问题可能还是样品。饮料很复杂，分析蛋白还需纯化。
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19楼2013-07-28 21:05:44
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和龟赛跑的人

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 樱花稀砂 at 2013-07-28 11:29:18
浓缩胶的时候电压是10Am，分离胶的时候电压是20Am，高了吗?...

一块板的话高了
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20楼2013-07-29 16:24:12
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