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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 植物叶片红叶石楠石蜡切片，组织不完整，碎的，求解啊，急！！各位好心的大侠帮帮忙吧
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果A果

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物叶片红叶石楠石蜡切片，组织不完整，碎的，求解啊，急！！各位好心的大侠帮帮忙吧已有1人参与

植物叶片红叶石楠石蜡切片，切片展开后在显微镜下观察植物组织都完整，上下表皮都完整，栅栏组织也排列整齐，但55℃烘片4小时后，脱蜡（纯二甲苯1h两次，1/2二甲苯1/2酒精5min，酒精梯度100%，85%，70%，50%，30%，水各5min，）番红染色过夜，脱色5s，固绿10s，脱色5s,封片后在显微镜下观察组织全碎了，而且是一段有一段没有的，番红也染不上，观察不到红色，请问这是什么原因？求各位大侠帮助啊，急啊.
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1楼2013-07-26 12:55:08
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walkmanloney

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个是我自己做石蜡切片的脱蜡程序：主要参考了科学出版社出版李和平主编《植物显微技术（第二版）》部分内容。一般的组织都可以切得出来。
•脱蜡：
1、        二甲苯Ⅰ，30min。
2、        二甲苯Ⅱ，3min。
3、        无水乙醇与二甲苯1：1溶液，3min。
•复水
1、        无水乙醇，3min。
2、        95%乙醇Ⅰ，3min。
3、        80%乙醇，3min。
4、        70%乙醇，3min。
5、        50%乙醇，3min。（50%乙醇=50mL95%乙醇+45mL蒸馏水）
6、        30%乙醇，3min。（30%乙醇=30mL95%乙醇+65mL蒸馏水）
7、        蒸馏水Ⅰ，3min。
•染色：
番红水溶液（1%），2h。
番红染色液的配制：
成分        用量        配制方法
番红        1g        将番红溶于蒸馏水中，使其完全溶解，过滤。
蒸馏水        100mL       
•脱水：
1、        蒸馏水Ⅱ，3min。
2、        蒸馏水Ⅰ，3min。
3、        30%乙醇，3min。
4、        50%乙醇，3min。
5、        70%乙醇，3min。
6、        80%乙醇，3min。
7、        95%乙醇，3min。
•染色：
固绿水溶液（95%），50s。
固绿染色液的配制：
成分        用量        配制方法
固绿        0.5g        将固绿溶于乙醇中，使其完全溶解，过滤。
95%乙醇        100mL       
•透明：
1、95%乙醇Ⅱ，3min。
2、无水乙醇，3min。
3、无水乙醇与二甲苯1：1溶液，3min。
4、        二甲苯Ⅰ，3min。
5、        二甲苯Ⅱ，3min。
封片
   从上一步的二甲苯Ⅱ中捞出（戴手套），趁二甲苯没干之前在载玻片正面用玻璃棒滴上2～3滴中性树胶（中性树胶与二甲苯3：1），然后用镊子将盖玻片盖上，拿到温箱40℃烘干两天。
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2楼2013-07-27 10:39:14
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wjj416

新虫 (初入文坛)
我曾经做过的石蜡切片，你的番红染不上色肯定是有问题的，要完全溶解，完全溶解的番红是没有颗粒状的东西啦，而且颜色很深。我之前也没染上番红。溶解后放在阳光下照射一段时间，我之前怎么都不成后来买了一瓶新的就可以完全溶解啦。这样效果还可以。把片子一定要展开。动作一定要轻轻的，你在封片的过程成一定不要使劲挤压片子或者敲打它，容易碎啦。盖盖玻片时候要侧面慢慢盖。你可以试试看
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3楼2013-07-30 10:27:03
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何超小

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wjj416 at 2013-07-30 10:27:03
我曾经做过的石蜡切片，你的番红染不上色肯定是有问题的，要完全溶解，完全溶解的番红是没有颗粒状的东西啦，而且颜色很深。我之前也没染上番红。溶解后放在阳光下照射一段时间，我之前怎么都不成后来买了一瓶新的就 ...

配置番红溶液后要在阳光下照一段时间？
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4楼2017-05-14 22:18:19
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何超小

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wjj416 at 2013-07-30 10:27:03
我曾经做过的石蜡切片，你的番红染不上色肯定是有问题的，要完全溶解，完全溶解的番红是没有颗粒状的东西啦，而且颜色很深。我之前也没染上番红。溶解后放在阳光下照射一段时间，我之前怎么都不成后来买了一瓶新的就 ...

要是盖玻片的时候有气泡，可以轻轻按压吗
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5楼2017-05-14 22:19:37
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

55℃烘片，温度太高了，这是造成组织散碎的原因。应该于45度-48度进行烘干。
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6楼2017-05-15 08:40:50
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