| 查看: 1314 | 回复: 0 | ||
[求助]
最近做回收胶浓度低，请大家来看看我的实验步骤是不是有问题。
|
|
1 制备1%浓度未加EB的琼脂糖凝胶，大孔胶。将目的基因产物20μL加入孔中，若有多个目的基因，中间要空一个上样孔。 2 电泳结束后，放入EB染色液中染色10min。 3 在紫外灯下将目的条带切下，尽量不要切到多余的胶。将切下的目的条带的胶放入1.5ml EP管中。 4 空管事先称好重量，装胶后称重，得出胶重，按照QIANGEN试剂盒说明，提取目的基因。 5 目的基因片段在100—1000bp之间，加入三倍体积QXI试剂，即胶重0.1g，则QXI加0.3ml。 6 加入QXII试剂10ul，振荡30s。QXII在加样之前要充分振荡。 7 将加好样的EP管放入50℃水浴锅中，以溶解胶结合DNA，总共10min。需要每2min振荡1次，共5次。并观察颜色是否仍为黄色。 8 室温离心，13000rpm，30s，枪吸掉上清液。 9 加500μLQXI buffer 清洗，振荡，离心，室温，13000rpm，30s。枪吸掉上清液。 10 加500μL PE buffer 清洗，振荡，离心，室温，13000rpm，30s。枪吸掉上清液。 11 重复用 PE buffer清洗一次。吸净上清液，室温干燥至沉淀变白。 12 加15μL 灭菌ddH2O，振荡，混匀，室温放置5min。 13 离心，室温，13000rpm，30s，将上清移至新管中，即得提纯的目的基因. 再请教一下，如果要回收胶的话，做胶的TBE需要用EDTA调PH吗？ 还有一个问题是，T4连接之后，在转化到感受态细胞之前，是不是要有一个酒精沉淀DNA的步骤？ [ Last edited by sars37 on 2013-7-24 at 15:19 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有192人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
点击这里搜索更多相关资源
10