24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1297  |  回复: 0

sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 最近做回收胶浓度低,请大家来看看我的实验步骤是不是有问题。

1 制备1%浓度未加EB的琼脂糖凝胶,大孔胶。将目的基因产物20μL加入孔中,若有多个目的基因,中间要空一个上样孔。
2 电泳结束后,放入EB染色液中染色10min。
3 在紫外灯下将目的条带切下,尽量不要切到多余的胶。将切下的目的条带的胶放入1.5ml EP管中。
4 空管事先称好重量,装胶后称重,得出胶重,按照QIANGEN试剂盒说明,提取目的基因。
5 目的基因片段在100—1000bp之间,加入三倍体积QXI试剂,即胶重0.1g,则QXI加0.3ml。
6 加入QXII试剂10ul,振荡30s。QXII在加样之前要充分振荡。
7 将加好样的EP管放入50℃水浴锅中,以溶解胶结合DNA,总共10min。需要每2min振荡1次,共5次。并观察颜色是否仍为黄色。
8 室温离心,13000rpm,30s,枪吸掉上清液。
9 加500μLQXI buffer 清洗,振荡,离心,室温,13000rpm,30s。枪吸掉上清液。
10 加500μL PE buffer 清洗,振荡,离心,室温,13000rpm,30s。枪吸掉上清液。
11 重复用 PE buffer清洗一次。吸净上清液,室温干燥至沉淀变白。
12 加15μL 灭菌ddH2O,振荡,混匀,室温放置5min。
13 离心,室温,13000rpm,30s,将上清移至新管中,即得提纯的目的基因.
再请教一下,如果要回收胶的话,做胶的TBE需要用EDTA调PH吗?
还有一个问题是,T4连接之后,在转化到感受态细胞之前,是不是要有一个酒精沉淀DNA的步骤?

[ Last edited by sars37 on 2013-7-24 at 15:19 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子,希望有用哦~

科研从小木虫开始,人人为我,我为人人
相关版块跳转 我要订阅楼主 sars37 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +7 不逢春 2026-04-05 8/400 2026-04-05 23:34 by 来看流星雨10
[考研] 301求调剂 +5 细胞相关蛋白 2026-04-02 9/450 2026-04-05 20:14 by lys0704
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 385分 生物学(071000)求调剂 +11 qf626 2026-04-01 11/550 2026-04-05 17:35 by Ecowxq666!
[考研] 材料专硕 调剂 +14 CXN123456 2026-04-03 14/700 2026-04-05 17:18 by Hdyxbekcb
[考研] 367求调剂 +3 谢28 2026-03-30 3/150 2026-04-05 13:27 by huangmoli
[考研] 295求调剂 +10 xndjjj 2026-04-04 10/500 2026-04-05 11:19 by 猪会飞
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分,本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] +5 化工专硕323分 2026-04-04 5/250 2026-04-05 08:02 by 544594351
[考研] 材料调剂 +18 一样YWY 2026-04-02 19/950 2026-04-04 22:14 by hemengdong
[考研] 321求调剂 +13 认真求上学 2026-04-02 13/650 2026-04-04 18:23 by macy2011
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 化学调剂求助 +6 LULONG1 2026-04-03 6/300 2026-04-03 23:13 by qzxyhcsy
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
[考研] 350求调剂 +7 阿佳~ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 0710生物学求调剂! +6 叙述文 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:39 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
信息提示
请填处理意见