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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建时多了3个碱基问题大不
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 载体构建时多了3个碱基问题大不

前面克隆了一个基因，在起始密码子那连着两个ATG，用ORF finder找的ORF是ATGATG.........,但是用BLASTX对比了一下同源基因，好像是从第二个ATG开始的。
我前面构建的所有载体，包括亚细胞定位载体，酵母双杂载体，BIFC载体都是基于ORF FINDER的基础上构建的，也就是说把第一个ATG也构建到载体上了，这样会不会对我的结果有影响呢？我是用infusion方法构建的，所以也就是可能多了这三个碱基。

请大家不吝赐教，多谢！
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1楼 2013-07-24 08:01:59
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shizishanshang: 金币+3, 谢谢！ 2013-07-24 18:02:17
阅读框没有错，不会有问题的，放心吧。
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5楼2013-07-24 17:38:24
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:11:06
shizishanshang: 金币+3, 多谢！没有影响最好啊，省得我重新去构建 2013-07-24 12:36:30
放心，没有问题的！蛋白的N端和C端添加or减少个别氨基酸对蛋白三级结构几乎没哟影响。
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-07-24 09:00:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shizishanshang: 金币+3, 谢谢！ 2013-07-24 13:29:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 14:43:25
RNA聚合酶会识别启动子下游的第一个ATG，你的表达产物比原序列多一个met，不会移码，完全没有问题。
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3楼2013-07-24 13:15:58
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shizishanshang: 金币+3, 谢谢！ 2013-07-24 18:02:00
同意2楼3楼，就多一个氨基酸而已，应该没大问题
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4楼2013-07-24 16:38:18
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