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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 载体构建时多了3个碱基问题大不

前面克隆了一个基因,在起始密码子那连着两个ATG,用ORF finder找的ORF是ATGATG.........,但是用BLASTX对比了一下同源基因,好像是从第二个ATG开始的。
我前面构建的所有载体,包括亚细胞定位载体,酵母双杂载体,BIFC载体都是基于ORF FINDER的基础上构建的,也就是说把第一个ATG也构建到载体上了,这样会不会对我的结果有影响呢?我是用infusion方法构建的,所以也就是可能多了这三个碱基。

请大家不吝赐教,多谢!
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 11:11:06
shizishanshang: 金币+3, 多谢!没有影响最好啊,省得我重新去构建 2013-07-24 12:36:30
放心,没有问题的!蛋白的N端和C端添加or减少个别氨基酸对蛋白三级结构几乎没哟影响。
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-24 09:00:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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shizishanshang: 金币+3, 谢谢! 2013-07-24 13:29:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 14:43:25
RNA聚合酶会识别启动子下游的第一个ATG,你的表达产物比原序列多一个met,不会移码,完全没有问题。
3楼2013-07-24 13:15:58
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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shizishanshang: 金币+3, 谢谢! 2013-07-24 18:02:00
同意2楼3楼,就多一个氨基酸而已,应该没大问题
4楼2013-07-24 16:38:18
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shizishanshang: 金币+3, 谢谢! 2013-07-24 18:02:17
阅读框没有错,不会有问题的,放心吧。
5楼2013-07-24 17:38:24
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nanamaka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
shizishanshang: 金币+3, 谢谢! 2013-07-24 22:55:41
蛋白翻译会从第一个ATG开始,问题不大
人生若只如初见
6楼2013-07-24 22:24:29
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