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RNA提取电泳效果不好
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细胞提取的RNA（五个条带），结果图很不理想，组织提取的RNA（两个条带）也是一样，5s前面还有一条很亮的条带，不知道原因在哪里？求论坛高人指点 20130723rna.JPG  20130722rna.JPG |
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共同探讨 1、提取RNA电泳出现多条带这种现象是跟样品（物种以及物种所处生长时期）有关。有些物种28S非常弱，电泳上样量少甚至看不到，造成所提RNA只有一条18S的假象。也有一些物种存在大量其他细胞器（如叶绿体等）的RNA。或者是一些RNA转录前体等.... 2、如果此样品蛋白含量多可以减少样品用量。但在加氯仿振荡混匀这一步必须充分，或可以使用用氯仿抽提两次对去蛋白有帮助。 3、我觉得如果是机械力造成的断裂应该是随机的，即断裂后的片段大小应该是随机的（即迷散，1000nt 601nt 399nt 400nt 600nt....）。断成同一个长度的可能性不大。多带表明片段大小是一致的。（参考基因组DNA提取，如果真正操作剧烈提出来是拖尾，即主带以下弥散，很少见基因组提取出来是多条带的吧？） 4、非常赞同。 纯属个人意见，各位大神指教。 |
11楼2013-07-25 09:18:19
lmcyjxs
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306495799: 金币+40, ★★★很有帮助, 过程要在冰上放置吗？加入异丙醇是不是要轻轻颠倒混匀啊？ 2013-07-24 09:30:30
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:08:39
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你的每个样品主要是有DNA的污染，你的是什么方法提的？试剂是不是自己配的？酚氯仿抽提液是你自己配的吗？如果是，注意酚要选水饱和酚。 1 你在每次取上清的时候，不要取到中间层，宁愿取少点，够用就行。看的图虽然有DNA污染，但是量是很丰富的。DNA也是溶在水相的，只是在靠近中间层那里。 2 电泳上样量不知你上多少，从第一个图的第一个条带来看，稍大了点，其他基本还好。 3 至于为什么这么多条带，我一时没有想明白，我觉得可能你在提取过程中，震荡过于剧烈造成的，不过这点不确定，你尝试着有些步骤不要振荡太剧烈，以免机械剪切力造成条带断裂。 4 出现这么多条带，还有可能是降解了。你操作过程中尽量注意环境卫生、温度把控，另外提取时，细菌的量不要太多，太多也会易降解的。 祝好！ |
2楼2013-07-23 18:36:56
谢开龙
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3楼2013-07-24 00:13:05
lmcyjxs
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4楼2013-07-24 00:18:09