提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净 - 分子生物 - 综合其他

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新虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-23 00:32:05
不应该呀。是不是你的反应体系浓度太高了？还有，你用水做模板能不能P出来？我想是不是体系污染了。...

我又重提了一批RNA，两个菌的，做了Dnase1处理，结果一管P出来，另一管就没有P出来..........

11楼2013-07-24 15:44:23

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铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:

11楼: Originally posted by 达菲鸭 at 2013-07-24 15:44:23
我又重提了一批RNA，两个菌的，做了Dnase1处理，结果一管P出来，另一管就没有P出来.............

DNase处理有时候是这样的，有些样品能处理干净，有些不行。一般就是样品提的纯度问题。我的经验就是稍微把酶用过量，保证处理干净。因为RNA不如DNA稳定，一般不要处理时间过长，增加RNA降解的可能。

12楼2013-07-24 23:27:05

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新虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by 达菲鸭 at 2013-07-24 14:05:21
对了，分两次消化有什么好处呢？...

分两次其实也只是经验，也不一定见得会有很好的效果。
只是考虑到DNase是比较容易失活的酶，在消化一段时间后可能活性有所下降再补充一些额外的DNase再继续消化，这样相当于延长的消化时间以及增加了酶量，应该对去除DNA会有所帮助。

伟大航线....

13楼2013-07-25 09:06:21

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