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达菲鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-23 00:32:05
不应该呀。是不是你的反应体系浓度太高了?还有,你用水做模板能不能P出来?我想是不是体系污染了。...

我又重提了一批RNA,两个菌的,做了Dnase1处理,结果一管P出来,另一管就没有P出来..........
11楼2013-07-24 15:44:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 达菲鸭 at 2013-07-24 15:44:23
我又重提了一批RNA,两个菌的,做了Dnase1处理,结果一管P出来,另一管就没有P出来.............

DNase处理有时候是这样的,有些样品能处理干净,有些不行。一般就是样品提的纯度问题。我的经验就是稍微把酶用过量,保证处理干净。因为RNA不如DNA稳定,一般不要处理时间过长,增加RNA降解的可能。
12楼2013-07-24 23:27:05
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 达菲鸭 at 2013-07-24 14:05:21
对了,分两次消化有什么好处呢?...

分两次其实也只是经验,也不一定见得会有很好的效果。
只是考虑到DNase是比较容易失活的酶,在消化一段时间后可能活性有所下降再补充一些额外的DNase再继续消化,这样相当于延长的消化时间以及增加了酶量,应该对去除DNA会有所帮助。
伟大航线....
13楼2013-07-25 09:06:21
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