24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2851  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦中江楼

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达蛋白纯化

本人刚开始做实验,毕赤酵母用甲醇诱导表达的蛋白在培养基中,应该怎样提纯,蛋白加了His-tag标签,用镍和层析怎样处理培养基?求镍和层析的具体纯化步骤。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高大上小天鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-23 07:54:56
既然是分泌在培养基中,先过个超滤膜,把蛋白浓缩下,然后溶解在上样缓冲液中,上镍亲和柱,后面的方法就和普通的镍柱亲和层析一样了。

你好,我现在遇到的问题是离心后,含有分泌蛋白的上清颜色很黄,过超滤膜容易把膜堵上,你的颜色黄吗?
11楼2016-02-28 09:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你去看IMAC说明书了,上面应该写的很清楚
不过你现确定酵母的破胞,那个比E.coli麻烦
2楼2013-07-22 20:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-23 08:19:17
既然是分泌在培养基中,先过个超滤膜,把蛋白浓缩下,然后溶解在上样缓冲液中,上镍亲和柱,后面的方法就和普通的镍柱亲和层析一样了。
3楼2013-07-23 07:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦中江楼

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-07-23 07:54:56
既然是分泌在培养基中,先过个超滤膜,把蛋白浓缩下,然后溶解在上样缓冲液中,上镍亲和柱,后面的方法就和普通的镍柱亲和层析一样了。

我的蛋白在培养基里,是不是说不需要超声破菌这一步,直接上柱就可以了?
4楼2013-07-23 08:56:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见