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seersino

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[求助] 求助——基因亚克隆

本人需要把目的片段亚克隆到12000bp的载体中，酶切鉴定重组质粒时，目的片段正确但载体大小不对，大约5000bp。开始怀疑环境中污染，后来换了几个地方都是同样结果。想不出什么原因了。请各位高手帮忙。这个事困扰我很久了。谢谢

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-29 at 16:03 ]

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生物民工

1楼 2013-07-20 18:09:39

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bullfrog325

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 21:47:54

载体是怎么制备的, 酶切完成后割胶回收时有没有发现质粒大小异样?

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2楼2013-07-20 18:33:04

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changes

木虫 (正式写手)

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★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:51:29

先鉴定载体有没有问题，可以利用酶切(选择多克隆位点和其上下游的其它的酶切位点)，或者根据载体序列设计引物对载体进行测序验证。

其次才能进行载体的构建，构建成功的克隆子最终也要进行测序验证。

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3楼2013-07-20 22:26:40

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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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3楼说的对啊，先确定载体对不对啊

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4楼2013-07-21 20:58:26

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seersino

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引用回帖:

2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-20 18:33:04
载体是怎么制备的, 酶切完成后割胶回收时有没有发现质粒大小异样?

载体怎么制的我不清楚切胶回收跑电泳条带大小没问题

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生物民工

5楼2013-07-24 22:19:02

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seersino

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引用回帖:

3楼: Originally posted by changes at 2013-07-20 22:26:40
先鉴定载体有没有问题，可以利用酶切(选择多克隆位点和其上下游的其它的酶切位点)，或者根据载体序列设计引物对载体进行测序验证。

其次才能进行载体的构建，构建成功的克隆子最终也要进行测序验证。

载体是构建好的我现在的问题就是亚克隆后酶切验证大片段的位置不对有哪个大神遇见过这种情况我不知道是哪出的问题该怎么解决