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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教大家一个问题。
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

[交流] 求教大家一个问题。

今天PCR后，跑胶的时候看着是一条带，测的时候，发现260/280，竟然到了2.58。
关于这个情况，我想不明白 ，纯的RNA不才2.0吗？ 为什么会到这么高，这代表什么意思呢？
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1楼 2013-07-20 17:52:20
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
liyongliangx(金币+1): 谢谢参与
楼主的问题是啥意思啊, 又是PCR测量, 有是RNA测量....
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2楼2013-07-20 18:27:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
liyongliangx(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。热心的顾问 2013-07-21 12:14:08
PCR产物测含量前是否做了纯化？PCR体系里有dNTP会干扰紫外吸收。
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4楼2013-07-20 22:56:42
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-20 18:27:49
楼主的问题是啥意思啊, 又是PCR测量, 有是RNA测量....

就是PCR 产物切胶后回收 ，测了DNA浓度是2.58 ，不知道是为什么
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5楼2013-07-21 19:25:30
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-20 22:56:42
PCR产物测含量前是否做了纯化？PCR体系里有dNTP会干扰紫外吸收。

切胶回收的。
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6楼2013-07-21 19:27:12
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bioysy

铜虫 (小有名气)
★
liyongliangx(金币+1): 谢谢参与
关键是PCR的目标条带是否扩出来了，其它的都不重要，你不就是做个PCR吗？
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7楼2013-07-21 20:48:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-21 19:27:12
切胶回收的。...

那就不是很清楚了，经纯化的PCR片段没有达到过这么高的A260/280。
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8楼2013-07-21 21:13:45
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
liyongliangx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-21 23:06:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-21 19:25:30
就是PCR 产物切胶后回收 ，测了DNA浓度是2.58 ，不知道是为什么...

当PCR产物回收后的浓度低的时候度数就特别容易受缓冲液成分和杂质的影响. 看楼主接下来的步骤的什么, 一般情况下可以忽略A260/280.
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9楼2013-07-21 21:32:48
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-21 21:32:48
当PCR产物回收后的浓度低的时候度数就特别容易受缓冲液成分和杂质的影响. 看楼主接下来的步骤的什么, 一般情况下可以忽略A260/280....

接下来做重组PCR的，结果一直出不来。
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10楼2013-07-22 19:23:07
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yingying15883楼
2013-07-20 21:39   回复  
liyongliangx(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币-1, 违规存档, 请勿单纯表情回复 2013-07-21 12:14:26
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