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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来
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喵了个咪yaya

新虫 (小有名气)

[求助] IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来

求助各位大侠，我在做IFN-γ，在公司送来引物后连退火温度都P不出来。换了几次师姐做的模板，这是我自己最近一次提的模板，都弄不出。引物一共是3对，都没有弄出来，图上的是优化后的引物（用primer5设计的，各项指标见图，都是none，Oligo上则说是产物和引物退火温度差距过大，其他没有什么不对，见图）和文献中找的引物，TOUCHDOWN 也做过了，师姐也帮做过了，同学也帮做过，都没有p出来。求帮助找原因。
IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来
PCR图.PNG


IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来-1
2.PNG


IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来-2
3.PNG
IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来-3
IFN-γ-1.PNG


IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来-4
IFN-γ-1 BLAST.PNG


IFN-γ的PCR扩不出来，连梯度都做不出来-5
IFN-γ-2 BLAST.PNG



[ Last edited by 喵了个咪yaya on 2013-7-17 at 15:18 ]
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1楼 2013-07-17 15:12:48
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whitewave

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
喵了个咪yaya: 金币+2 2013-07-19 09:29:50
喵了个咪yaya: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-02 20:09:47
内容已删除
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天生我才
2楼2013-07-19 08:23:05
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喵了个咪yaya

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whitewave at 2013-07-19 08:23:05
我看楼主做图说的比较专业，估计目标序列和引物出错的新手的问题很低。跑cDN A 电泳就不专业了，要跑就R N A 看下完整性，另外确定你额模板里面一定有你目标基因表达？如果本来就不表达，那谁也没法！最后建议，梯度 ...

昨天做出来了，确实是模板问题，换了两个个细胞株，表达量都不一样。
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3楼2013-07-19 09:30:40
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