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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 289KDa的蛋白的转膜条件

最近在做m-TOR蛋白(分子量是289KDa),做了两周了都做不出来。电泳是恒压100V,3h;转膜是恒流200mA,3h。每次转膜后不是没有marker了,就是做完了marker还在胶上(还有一次转膜完后发现maker在滤纸上了)。总之就是转膜时总有问题。有知道的同仁能给点好的建议吗?谢谢啦!
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-15 07:45:45
转膜时候的电压调小一些吧,或者再加一些增强膜透性的物质,可能是因为电流不稳定。

谢谢你!我现在已经做出条带了,确实存在电流不稳定的情况,但我不确定之前做不出来是否与这有关。我现在的条件是转膜恒流300mA转140min。还是谢谢你!
4楼2013-07-17 09:46:09
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-15 10:59:12
转膜时候的电压调小一些吧,或者再加一些增强膜透性的物质,可能是因为电流不稳定。
2楼2013-07-15 07:45:45
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:59:26
感觉转膜时间有点短,延长时间试一下。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-07-15 09:11:30
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王耀晨01

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by herjasmine at 2013-07-17 09:46:09
谢谢你!我现在已经做出条带了,确实存在电流不稳定的情况,但我不确定之前做不出来是否与这有关。我现在的条件是转膜恒流300mA转140min。还是谢谢你!...

您好,我现在也要做m-TOR,请问您用的什么marker?Thermo货号为26625,,4-300kda的marker可以吗?转膜条件是什么?非常感谢,在线等。。
5楼2015-05-12 17:24:27
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